| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第12-16页 |
| 2 基于A*蛋白的蛋白核酸修饰方法探索 | 第16-60页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-21页 |
| 2.1.1 质粒及菌株 | 第16-17页 |
| 2.1.2 单链核酸 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要试剂与耗材 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第19-21页 |
| 2.2 主要溶液配方 | 第21-23页 |
| 2.2.1 培养基 | 第21页 |
| 2.2.2 主要溶液 | 第21-23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-39页 |
| 2.3.1 表达载体pET28a-EGFP-A*-Y139H的构建 | 第23-29页 |
| 2.3.2 表达载体pET28a-EGFP-A*-Y77F的构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3 表达载体pET28a-A*-Y139H的构建 | 第30页 |
| 2.3.4 表达载体pET28a-A*-Y77F的构建 | 第30-31页 |
| 2.3.5 EGFP-A*-Y139H蛋白的诱导表达 | 第31页 |
| 2.3.6 EGFP-A*-Y139H/EGFP-A*-Y77F蛋白的纯化 | 第31-32页 |
| 2.3.7 A*-Y139H/A*-Y77F蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 2.3.8 凝胶过滤层析柱纯化及SDS-PAGE分析检测 | 第33页 |
| 2.3.9 蛋白的浓缩、缓冲液的更换 | 第33-34页 |
| 2.3.10 蛋白质浓度测定 | 第34页 |
| 2.3.11 目的蛋白的保存 | 第34页 |
| 2.3.12 融合蛋白在体外与单链核酸的结合 | 第34-36页 |
| 2.3.13 蛋白核酸复合物的分离 | 第36-38页 |
| 2.3.14 A*抗体的制备 | 第38页 |
| 2.3.15 A*蛋白分子量测定 | 第38-39页 |
| 2.4 实验结果 | 第39-57页 |
| 2.4.1 表达载体pET28a-EGFP-A*-Y139H的构建与验证 | 第39-40页 |
| 2.4.2 表达载体pET28a-EGFP-A*-Y77F的构建与验证 | 第40-43页 |
| 2.4.3 表达载体pET28a-A*-Y139H的构建与验证 | 第43-44页 |
| 2.4.4 表达载体pET28a-A*-Y77F的构建与验证 | 第44-45页 |
| 2.4.5 蛋白的表达纯化 | 第45-48页 |
| 2.4.6 蛋白与单链核酸反应 | 第48-52页 |
| 2.4.7 蛋白核酸复合物的分离 | 第52-56页 |
| 2.4.8 A*蛋白分子量测定 | 第56-57页 |
| 2.5 讨论 | 第57-58页 |
| 2.6 小结 | 第58-60页 |
| 3 HUH蛋白的体外表达及活性探索 | 第60-72页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第60-63页 |
| 3.1.1 质粒及菌株 | 第60-61页 |
| 3.1.2 基因及引物设计 | 第61-63页 |
| 3.1.4 主要试剂与耗材 | 第63页 |
| 3.1.5 主要仪器 | 第63页 |
| 3.2 主要溶液配方 | 第63页 |
| 3.3 实验方法 | 第63-66页 |
| 3.3.1 表达载体的构建 | 第63-65页 |
| 3.3.2 HUH蛋白的诱导表达及纯化 | 第65-66页 |
| 3.3.3 HUH蛋白与单链核酸的反应 | 第66页 |
| 3.4 实验结果 | 第66-70页 |
| 3.4.1 表达载体pET28a-HUH的构建 | 第66-68页 |
| 3.4.2 HUH蛋白的纯化 | 第68-69页 |
| 3.4.3 六种HUH蛋白与核酸的反应 | 第69-70页 |
| 3.5 讨论 | 第70-71页 |
| 3.6 小结 | 第71-72页 |
| 4 电化学平台构建的测试 | 第72-82页 |
| 4.1 实验材料和设备 | 第73页 |
| 4.2 主要溶液配方 | 第73-74页 |
| 4.3 实验方法 | 第74-75页 |
| 4.3.1 酶电极的修饰制备 | 第74-75页 |
| 4.3.2 酶电极的表征 | 第75页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第75-80页 |
| 4.4.1 酶电极的CV响应 | 第75-76页 |
| 4.4.2 酶电极的工作参数优化 | 第76-79页 |
| 4.4.3 酶电极的电流响应 | 第79-80页 |
| 4.5 小结 | 第80-82页 |
| 5 结论 | 第82-84页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 文献综述 蛋白核酸复合体的应用及构建方法 | 第88-122页 |
| 1 蛋白核酸复合体的应用 | 第89-94页 |
| 1.1 生物分析诊断 | 第89-91页 |
| 1.1.1 蛋白及核酸检测的探针 | 第89-91页 |
| 1.1.2 生物芯片 | 第91页 |
| 1.2 纳米生物分子制造 | 第91-94页 |
| 1.2.1 功能性纳米阵列 | 第91-92页 |
| 1.2.2 多酶复合体 | 第92-94页 |
| 1.2.3 功能性纳米颗粒 | 第94页 |
| 2 蛋白核酸复合体构建方法 | 第94-106页 |
| 2.1 非共价的位点特异性的连接方法 | 第95-100页 |
| 2.1.1 亲和标签 | 第95-99页 |
| 2.1.2 辅酶重构的连接方法 | 第99-100页 |
| 2.1.3 结构域相互作用:DNA结合蛋白 | 第100页 |
| 2.2 共价的非位点特异性连接方法 | 第100-101页 |
| 2.3 共价的位点特异性连接方法 | 第101-106页 |
| 2.3.1 表达连接蛋白介导 | 第101-102页 |
| 2.3.2 叠氮基团介导 | 第102-103页 |
| 2.3.3 酶促连接法 | 第103-104页 |
| 2.3.4 自我连接蛋白标签介导 | 第104-105页 |
| 2.3.5 模板介导 | 第105-106页 |
| 3 HUH核酸内切酶 | 第106-111页 |
| 3.1 HUH核酸内切酶的概念 | 第106-107页 |
| 3.2 HUH核酸内切酶主要特性 | 第107-109页 |
| 3.3 噬菌体φ174的A蛋白及A*蛋白 | 第109-110页 |
| 3.4 其他HUH核酸内切酶 | 第110-111页 |
| 4 讨论及展望 | 第111-114页 |
| 参考文献 | 第114-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
