| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-22页 |
| 1.1 甘油磷酸二酯磷酸二酯酶简介 | 第13-14页 |
| 1.1.1 甘油磷酸二酯磷酸二酯酶的定义 | 第13页 |
| 1.1.2 甘油磷酸二酯磷酸二酯酶的研究现状 | 第13-14页 |
| 1.2 大肠杆菌表达系统 | 第14-19页 |
| 1.2.1 大肠杆菌表达系统研究进展 | 第14-17页 |
| 1.2.2 大肠杆菌表达宿主 | 第17页 |
| 1.2.3 大肠杆菌表达载体 | 第17-19页 |
| 1.3 立题意义及研究内容 | 第19-22页 |
| 1.3.1 立题背景与意义 | 第19-20页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.3.3 技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 GDPD-PF2003的生物信息学分析与表达菌株的构建 | 第22-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 菌株 | 第22页 |
| 2.1.2 培养基及溶液配制 | 第22-23页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.4 常用仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 GDPD-PF2003序列分析 | 第23页 |
| 2.2.2 GDPD-PF2003系统发育树构建 | 第23-24页 |
| 2.2.3 GDPD-PF2003模型构建 | 第24页 |
| 2.2.4 GDPD-PF2003-Pet28a-Shuffle T7表达菌株构建 | 第24-27页 |
| 2.3 实验结果 | 第27-30页 |
| 2.3.1 GDPD-PF2003氨基酸序列分析及系统发育树分析 | 第27-29页 |
| 2.3.2 GDPD-PF2003模型构建 | 第29-30页 |
| 2.3.3 Pet28a-GDPD-PF2003-Shuffle T7表达载体的构建 | 第30页 |
| 2.4 本章小结 | 第30-32页 |
| 第三章 GDPD-PF2003的表达与纯化 | 第32-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第32-34页 |
| 3.1.1 菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 培养基 | 第32-33页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.4 常用仪器 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-41页 |
| 3.2.1 重组菌株pET28a-PF2003-SHuffle-T7的表达 | 第34-36页 |
| 3.2.2 pET28a-PF2003-SHuffle-T7的表达条件的初步探索 | 第36-37页 |
| 3.2.3 GDPD-PF2003的纯化 | 第37-39页 |
| 3.2.4 纯化GDPD-PF2003蛋白浓度和活性的测定 | 第39-41页 |
| 3.3 结果讨论 | 第41-46页 |
| 3.3.1 pET28a-PF2003-SHuffle-T7的表达条件的初步探索 | 第41-44页 |
| 3.3.2 GDPD-PF2003的纯化 | 第44-46页 |
| 3.4 本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 GDPD-PF2003的酶学性质研究 | 第47-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第47-49页 |
| 4.1.1 菌株及培养基 | 第47页 |
| 4.1.2 试剂及溶液配制 | 第47-48页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第48-49页 |
| 4.2 实验方法 | 第49-51页 |
| 4.2.1 最适温度及温度稳定性测定 | 第49页 |
| 4.2.2 最适pH值测定 | 第49页 |
| 4.2.3 不同金属离子对GDPD-PF2003酶活力的影响 | 第49-50页 |
| 4.2.4 有机溶剂耐受性测定 | 第50页 |
| 4.2.5 GDPD-PF2003的圆二色谱分析 | 第50-51页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第51-55页 |
| 4.3.1 最适温度及稳定性 | 第51-52页 |
| 4.3.2 最适pH测定 | 第52-53页 |
| 4.3.3 不同金属离子对GDPD-PF2003酶活力的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.4 有机溶剂耐受性 | 第54-55页 |
| 4.3.5 GDPD-PF2003的圆二色谱分析 | 第55页 |
| 4.4 本章小结 | 第55-57页 |
| 第五章 对不同磷脂底物的水解特性研究 | 第57-63页 |
| 5.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 5.1.1 菌株及培养基 | 第57页 |
| 5.1.2 试剂及溶液配制 | 第57页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第57-58页 |
| 5.2 实验方法 | 第58页 |
| 5.2.1 对不同底物的水解反应 | 第58页 |
| 5.2.2 HPLC检测方法 | 第58页 |
| 5.2.3 GDPD-PF2003与底物的分子对接 | 第58页 |
| 5.3 结果讨论 | 第58-62页 |
| 5.3.1 GDPD-PF2003对不同磷脂底物的水解反应 | 第58-59页 |
| 5.3.2 GDPD-PF2003对不同磷脂底物的分子对接分析 | 第59-62页 |
| 5.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 结论与展望 | 第63-65页 |
| 结论 | 第63页 |
| 创新点 | 第63页 |
| 展望 | 第63-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 附表 | 第73页 |
