| 中文摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-36页 |
| 1.1 博来霉素的发现及临床应用 | 第15-17页 |
| 1.2 博来霉素的抗癌作用机理 | 第17-18页 |
| 1.3 博来霉素检测方法研究进展 | 第18-23页 |
| 1.4 DNA分子识别探针 | 第23-31页 |
| 1.4.1 具有催化活性的DNA酶 | 第24-26页 |
| 1.4.2 适体DNA | 第26-30页 |
| 1.4.3 其他 | 第30-31页 |
| 1.5 酶介导的等温信号扩增策略 | 第31-35页 |
| 1.5.1 链置换扩增反应 | 第32-34页 |
| 1.5.2 滚环扩增反应 | 第34-35页 |
| 1.6 本论文的研究目的和研究内容 | 第35-36页 |
| 1.6.1 研究目的 | 第35页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第35-36页 |
| 第二章 双环发夹探针介导的链置换扩增策略用于免标记检测博来霉素 | 第36-55页 |
| 2.1 引言 | 第36-37页 |
| 2.2 实验部分 | 第37-39页 |
| 2.2.1 试剂 | 第37-39页 |
| 2.2.2 仪器与装置 | 第39页 |
| 2.3 实验步骤 | 第39-42页 |
| 2.3.1 高温高压灭菌 | 第39-40页 |
| 2.3.2 DNA的分装及储存 | 第40页 |
| 2.3.3 博来霉素的活化及双环发夹探针的裂解反应 | 第40页 |
| 2.3.4 链置换扩增反应 | 第40页 |
| 2.3.5 荧光测量 | 第40-41页 |
| 2.3.6 聚丙烯酰氨凝胶电泳实验 | 第41-42页 |
| 2.4 结果和讨论 | 第42-54页 |
| 2.4.1 实验原理 | 第42-43页 |
| 2.4.2 博来霉素检测体系的可行性分析 | 第43-44页 |
| 2.4.3 博来霉素检测体系反应条件的优化 | 第44-49页 |
| 2.4.3.1 双环发夹探针碱基序列设计的优化 | 第45-46页 |
| 2.4.3.2 双环发夹探针浓度优化 | 第46-47页 |
| 2.4.3.3 信号探针浓度优化 | 第47页 |
| 2.4.3.4 酶浓度优化 | 第47-48页 |
| 2.4.3.5 NMM浓度优化 | 第48-49页 |
| 2.4.4 博来霉素检测体系的分析效能 | 第49-54页 |
| 2.4.4.1 检测体系的灵敏度和线性范围 | 第49-51页 |
| 2.4.4.2 精密度 | 第51-52页 |
| 2.4.4.3 特异性考察 | 第52页 |
| 2.4.4.4 在复杂生物基质中的检测性能以及回收率考察 | 第52-54页 |
| 2.5 小结 | 第54-55页 |
| 第三章 酶介导的级联扩增策略用于高灵敏且免标记检测博来霉素 | 第55-72页 |
| 3.1 引言 | 第55-56页 |
| 3.2 实验部分 | 第56-58页 |
| 3.2.1 材料与试剂 | 第56-58页 |
| 3.2.2 仪器与装置 | 第58页 |
| 3.3 实验步骤 | 第58-60页 |
| 3.3.1 高温高压灭菌 | 第58页 |
| 3.3.2 博来霉素切割双环发夹探针 | 第58-59页 |
| 3.3.3 酶介导的级联扩增反应 | 第59页 |
| 3.3.4 荧光测量 | 第59-60页 |
| 3.4 结果和讨论 | 第60-71页 |
| 3.4.1 实验原理 | 第60-61页 |
| 3.4.2 酶介导的级联扩增体系可行性分析 | 第61-62页 |
| 3.4.3 酶介导的级联扩增策略反应条件的优化 | 第62-67页 |
| 3.4.3.1 模板链HP_1碱基序列优化 | 第62-63页 |
| 3.4.3.2 模板链HP_2碱基序列优化 | 第63-64页 |
| 3.4.3.3 模板链HP_2浓度的优化 | 第64-65页 |
| 3.4.3.4 模板链HP_3浓度的优化 | 第65-66页 |
| 3.4.3.5 酶介导的级联扩增策略反应时间的优化 | 第66-67页 |
| 3.4.4 酶介导的级联扩增体系的分析效能 | 第67-71页 |
| 3.4.4.1 灵敏度和线性范围考察 | 第67-68页 |
| 3.4.4.2 精密度考察 | 第68-69页 |
| 3.4.4.3 选择性考察 | 第69-70页 |
| 3.4.4.4 复杂生物体系回收率实验 | 第70-71页 |
| 3.5 小结 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 硕士期间发表论文 | 第91-92页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第92页 |
