| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 主要英文缩略词 | 第8-12页 |
| 第1章 引言 | 第12-20页 |
| 1.1 耐辐射奇球菌简介 | 第12-20页 |
| 第2章 pprM基因缺失株的回补株构建与鉴定 | 第20-40页 |
| 2.1 材料及仪器设备 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验所用菌株、质粒及培养条件 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第22页 |
| 2.1.4 培养基、生化试剂的配制 | 第22-24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 E.coli质粒DNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 DNA片段的纯化 | 第25页 |
| 2.2.3 大肠杆菌感受态的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第26页 |
| 2.2.5 耐辐射奇球菌感受态细胞的制备与转化 | 第26-27页 |
| 2.2.6 pGEX-6p1pprM重组载体的验证 | 第27-28页 |
| 2.2.7 HA-pprM稳定表达重组载体的构建 | 第28-31页 |
| 2.2.8 耐辐射奇球菌pprM基因敲除回补株的构建及初步鉴定 | 第31页 |
| 2.2.9 Western blot检测HA-PprM融合蛋白的稳定表达 | 第31-34页 |
| 2.3 结果和分析 | 第34-39页 |
| 2.3.1 pGEX-6p1pprM重组载体的鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.2 HA-pprM稳定表达重组载体的鉴定 | 第35-38页 |
| 2.3.3 耐辐射奇球菌pprM基因敲除回补株的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4 本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 耐辐射奇球菌PprM蛋白靶DNA的筛选 | 第40-54页 |
| 3.1 材料和方法 | 第42-43页 |
| 3.1.1 实验所用菌株、质粒及培养条件 | 第42页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第42页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第42页 |
| 3.1.4 主要生化试剂的配制 | 第42-43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 细菌辐照样品制备 | 第43页 |
| 3.2.2 细菌的染色体破碎 | 第43-44页 |
| 3.2.3 免疫沉淀 | 第44页 |
| 3.2.4 免疫复合物的沉淀及清洗 | 第44-45页 |
| 3.2.5 DNA样品的回收 | 第45页 |
| 3.2.6 ChIP PCR引物设计 | 第45-47页 |
| 3.3 实验结果 | 第47-53页 |
| 3.3.1 PprM蛋白CSD结构域DNA结合特性生物信息学分析 | 第47-49页 |
| 3.3.2 细菌染色体破碎结果 | 第49-50页 |
| 3.3.3 ChIP PCR检测结果 | 第50-53页 |
| 3.4 本章小结 | 第53-54页 |
| 第4章 EMSA验证PprM蛋白的靶DNA | 第54-64页 |
| 4.1 材料和方法 | 第54-55页 |
| 4.1.1 实验所用菌株、质粒及培养条件 | 第54页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第54-55页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第55页 |
| 4.1.4 主要生化试剂的配制 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-59页 |
| 4.2.1 PprM蛋白诱导及纯化 | 第55-56页 |
| 4.2.2 探针设计 | 第56-57页 |
| 4.2.3 EMSA胶的配制 | 第57页 |
| 4.2.4 EMSA反应体系 | 第57-58页 |
| 4.2.5 电泳、转膜、紫外交联 | 第58-59页 |
| 4.2.6 化学发光法检测生物素标记的探针 | 第59页 |
| 4.3 实验结果 | 第59-61页 |
| 4.3.1 PprM蛋白的诱导 | 第59-60页 |
| 4.3.2 PprM蛋白的纯化 | 第60-61页 |
| 4.3.3 PprM蛋白与生物素探针的EMSA结果 | 第61页 |
| 4.4 本章小结 | 第61-64页 |
| 第5章 讨论 | 第64-68页 |
| 第6章 结论 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-76页 |
| 文献综述 耐辐射奇球菌应用研究进展 | 第76-84页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 作者攻读学位期间的科研成果 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
