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猪瘟病毒E2基因的克隆及在原核中的高效表达

中文摘要第6-7页
英文摘要第7页
第一章 猪瘟及猪瘟病毒的研究现状第8-27页
    §1.1 猪瘟概况第8-9页
    §1.2 CSFV的病原学特性及研究进展第9-11页
        §1.2.1 病毒粒子结构、形态及理化特性第9-10页
        §1.2.2 CSFV的抗原性、毒力和分型第10-11页
    §1.3 CSFV的繁殖过程及致病机理第11-14页
        §1.3.1 CSFV的侵入及其在宿主体内的分布第11-12页
        §1.3.2 CSFV在宿主细胞中的繁殖过程第12-13页
        §1.3.3 CSFV对宿主细胞的致病机理第13-14页
    §1.4 CSFV的分子生物学研究进展第14-24页
        §1.4.1 CSFV的基因组结构第14-22页
        §1.4.2 CSFV的分子免疫学研究进展第22-24页
    §1.5 猪瘟的防制策略与防制新技术的研究第24-27页
第二章 广西流行野毒株序列分析第27-42页
    §2.1 材料第27-28页
        §2.1.1 毒株第27-28页
        §2.1.2 引物的设计与合成第28页
        §2.1.3 主要试剂第28页
        §2.1.4 主要仪器第28页
    §2.2 实验方法第28-32页
        §2.2.1 RNA提取第28-29页
        §2.2.2 RT-PCR和nPCR第29-30页
        §2.2.3 琼脂糖凝胶电泳第30页
        §2.2.4 纯化回收DNA片段第30页
        §2.2.5 纯化产物与PMD81-T Vector连接第30页
        §2.2.6 新鲜感受态细胞的制备(CaCl2法)第30-31页
        §2.2.7 连接产物的转化第31页
        §2.2.8 重组质粒的提取第31-32页
        §2.2.9 重组质粒的鉴定第32页
        §2.2.10 计算机分析第32页
    §2.3 结果第32-40页
        §2.3.1 PCR扩增结果第33页
        §2.3.2 质粒PCR及酶切鉴定结果第33页
        §2.3.3 CSFV E2基因的核苷酸和相应的氨基酸序列第33-38页
        §2.3.4 核苷酸和氨基酸序列同源性比较第38-39页
        §2.3.5 3株广西流行毒的系统关系分析第39-40页
    §2.4 讨论第40-41页
        §2.4.1 3株CSFV E2基因核苷酸序列及氨基酸序列的同源性第40页
        §2.4.2 3株CSFV E2糖蛋白抗原区氨基酸的变异第40页
        §2.4.3 3株CSFV E2糖蛋白的信号肽序列和TMR序列的分析第40-41页
    §2.5 结论第41-42页
第三章 猪瘟病毒E2基因主要抗原区在大肠杆菌中的表达第42-57页
    §3.1 材料第42-43页
        §3.1.1 毒株第42页
        §3.1.2 菌株与质粒第42页
        §3.1.3 引物设计与合成第42-43页
        §3.1.4 工具酶及试剂第43页
        §3.1.5 仪器与设备第43页
    §3.2 实验方法第43-47页
        §3.2.1 广西玉林株与C-株E2基因的获取第43页
        §3.2.2 广西玉林株与C-株E2基因主要抗原区的获取第43页
        §3.2.3 重组表达载体的构建与鉴定第43-44页
        §3.2.4 E2基因主要抗原区在大肠杆菌中的表达第44页
        §3.2.5 表达蛋白的检测第44-47页
    §3.3 结果第47-52页
        §3.3.1 E2蛋白的抗原指数曲线第47-48页
        §3.3.2 E2基因主要抗原结构域扩增第48页
        §3.3.3 PGEME2-GXYL与PGEME2-C的PCR及酶切鉴定第48-49页
        §3.3.4 pPROEXE2-GXYL和pPROEXE2-C的PCR及酶切鉴定第49-50页
        §3.3.5 重组表达质粒pPROEXE2-GXYL和pPROEXE2-C构建第50-51页
        §3.3.6 大肠杆菌生长浓度OD_(600)值第51页
        §3.3.7 SDS-PAGE和Western blot检测结果第51-52页
    §3.4 讨论第52-55页
        §3.4.1 大肠杆菌表达系统第52-53页
        §3.4.2 表达毒株选择的依据第53页
        §3.4.3 重组表达质粒构建采用PGEM-T Easy载体第53-54页
        §3.4.4 表达的影响因素第54-55页
    §3.5 结论第55-57页
参考文献第57-64页
致谢第64-65页
作者简介第65页

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