| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 研究背景 | 第12页 |
| 1.2 毛尖紫萼藓概况 | 第12-13页 |
| 1.3 光系统Ⅱ反应中心蛋白简介 | 第13-14页 |
| 1.4 渗调蛋白简介 | 第14-15页 |
| 1.5 泛素羧基末端水解酶简介 | 第15-16页 |
| 1.6 苔藓植物耐旱机制研究进展 | 第16-18页 |
| 1.7 本研究的目的及意义 | 第18-20页 |
| 1.8 实验技术路线 | 第20-21页 |
| 2. GpPsbR、GpOsmC、GpUCH基因的克隆及生物信息学分析 | 第21-49页 |
| 2.1 试验材料 | 第21页 |
| 2.2 主要化学试剂 | 第21-22页 |
| 2.3 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.4 试验方法 | 第23-30页 |
| 2.4.1 总RNA的提取和纯化 | 第23页 |
| 2.4.2 GpOsmC、GpUCH基因 3′cDNA的克隆 | 第23-25页 |
| 2.4.3 3′-RACE PCR产物的胶回收 | 第25-26页 |
| 2.4.4 PCR胶回收产物的连接和转化 | 第26-27页 |
| 2.4.5 质粒的提取及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.4.6 GpOsmC、GpUCH基因全长cDNA序列的获得 | 第28页 |
| 2.4.7 GpPsbR、GpOsmC、GpUCH基因全长cDNA的克隆 | 第28-29页 |
| 2.4.8 生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.5 结果与分析 | 第30-46页 |
| 2.5.1 RNA质量检测 | 第30页 |
| 2.5.2 3’cDNA的克隆及酶切鉴定 | 第30-31页 |
| 2.5.3 全长cDNA序列的获得 | 第31-33页 |
| 2.5.4 GpPsbR、GpOsmC、GpUCH基因克隆 | 第33页 |
| 2.5.5 克隆重组质粒酶切结果 | 第33-34页 |
| 2.5.6 GpPsbR、GpOsmC、GpUCH基因生物信息学分析 | 第34-46页 |
| 2.6 讨论 | 第46-49页 |
| 3. 毛尖紫萼藓GpPsbR、GpOsmC、GpUCH基因的表达分析 | 第49-54页 |
| 3.1 试验材料 | 第49页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第49页 |
| 3.1.2 试剂 | 第49页 |
| 3.2 试验方法 | 第49-50页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第49页 |
| 3.2.2 cDNA第一链的合成 | 第49页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR引物设计 | 第49-50页 |
| 3.2.4 实时荧光定量PCR分析 | 第50页 |
| 3.2.5 数据处理与分析 | 第50页 |
| 3.3 结果与分析 | 第50-52页 |
| 3.3.1 GpPsbR、GPOsmC、GpUCH基因的表达特性分析 | 第50-52页 |
| 3.4 讨论 | 第52-54页 |
| 4. 表达载体的构建及遗传转化 | 第54-69页 |
| 4.1 试验材料 | 第54-56页 |
| 4.1.1 材料 | 第54页 |
| 4.1.2 酶及主要试剂 | 第54页 |
| 4.1.3 溶液及培养基的配制 | 第54-55页 |
| 4.1.4 植物培养基 | 第55-56页 |
| 4.2 试验方法 | 第56-59页 |
| 4.2.1 pRI101-AN表达载体双酶切 | 第56页 |
| 4.2.2 连接反应 | 第56页 |
| 4.2.3 重组质粒的双酶切鉴定 | 第56页 |
| 4.2.4 重组质粒的测序鉴定 | 第56页 |
| 4.2.5 农杆菌EHA105感受态细胞的制备 | 第56-57页 |
| 4.2.6 冻融法转化农杆菌EHA105及检测 | 第57页 |
| 4.2.7 叶盘法转化烟草 | 第57-58页 |
| 4.2.8 阳性植株的鉴定 | 第58-59页 |
| 4.3 结果与分析 | 第59-67页 |
| 4.3.1 植物表达载体的双酶切和测序鉴定 | 第59页 |
| 4.3.2 重组质粒导入根癌农杆菌 | 第59-61页 |
| 4.3.3 转基因植株的获得 | 第61-62页 |
| 4.3.4 影响农杆菌转化烟草的条件 | 第62-64页 |
| 4.3.5 T_1代烟草PCR和RT-PCR检测 | 第64-67页 |
| 4.4 讨论 | 第67-69页 |
| 4.4.1 表达载体的构建 | 第67页 |
| 4.4.2 卡那霉素浓度的筛选 | 第67-68页 |
| 4.4.3 预培养时间 | 第68页 |
| 4.4.4 侵染时间与侵染液浓度 | 第68页 |
| 4.4.5 PCR检测 | 第68-69页 |
| 5. GpPsbR、GpOsmC及GpUCH基因耐旱性分析 | 第69-77页 |
| 5.1 试验材料 | 第69页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第69页 |
| 5.1.2 试剂与仪器 | 第69页 |
| 5.2 试验方法 | 第69-70页 |
| 5.2.1 T_1代转基因植株生理生化指标的检测 | 第69-70页 |
| 5.3 结果与分析 | 第70-75页 |
| 5.3.1 干旱胁迫对T_1代转基因烟草土壤相对水含量的影响 | 第70页 |
| 5.3.2 干旱胁迫对T_1代转基因烟草可溶性物质的影响 | 第70-72页 |
| 5.3.3 干旱胁迫对T_1代转基因烟草光合参数的测定 | 第72-74页 |
| 5.3.4 干旱胁迫对T_1代转基因烟草叶绿素荧光的测定 | 第74-75页 |
| 5.4 讨论 | 第75-77页 |
| 结论 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
