| 内容提要 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第11-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-32页 |
| 一、人乳头瘤病毒假病毒 | 第16-25页 |
| 1. 人乳头瘤病毒中和抗体 | 第17-21页 |
| 1.1 预防性 HPV 疫苗与 HPV 抗体 | 第17-20页 |
| 1.2 自然感染与 HPV 抗体 | 第20-21页 |
| 2．人乳头瘤病毒血清学检测方法 | 第21-25页 |
| 2.1 酶联免疫吸附试验 | 第22-23页 |
| 2.2 竞争性鲁米诺免疫检测 | 第23-24页 |
| 2.3 基于 HPV 假病毒的体外中和试验 | 第24-25页 |
| 二、人类免疫缺陷病毒假病毒 | 第25-26页 |
| 1. HIV 耐药表型及中和抗体检测 | 第25-26页 |
| 1.1 以 PBMC 作为靶细胞的活病毒检测 | 第25-26页 |
| 1.2 以 A3R5 为靶细胞的重组病毒检测 | 第26页 |
| 1.3 以 TZM-bl 为靶细胞的假病毒检测 | 第26页 |
| 三、论文设计 | 第26-32页 |
| 1. 高通量 HPV 假病毒检测的平台的建立及应用 | 第27-28页 |
| 2. 高通量 HIV 假病毒检测体系的建立及应用 | 第28-32页 |
| 第二章 高通量人乳头瘤病毒假病毒检测体系的建立及应用 | 第32-78页 |
| 一 材料 | 第33-35页 |
| 1．细胞系 | 第33页 |
| 2. 质粒 | 第33页 |
| 3. HPV 疫苗及 HPV 抗原检测试剂 | 第33页 |
| 4. HPV 临床样本及实验动物 | 第33-34页 |
| 5. 常用溶液 | 第34-35页 |
| 二 方法 | 第35-42页 |
| 1. 报告基因及载体的扩增 | 第35-36页 |
| 2. PCR 产物的回收 | 第36-37页 |
| 3. PCR 回收产物的克隆 | 第37页 |
| 4. 将连接产物转化大肠杆菌 E.coli 化学感受态细胞 | 第37页 |
| 5. 质粒小量提取及 | 第37页 |
| 6. 质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| 7. 质粒的大量提取 | 第38页 |
| 8. 假病毒的制备 | 第38-40页 |
| 8.1 结构基因表达质粒和报告质粒共转染 293FT 细胞 | 第38-39页 |
| 8.2 转染后细胞的收集 | 第39页 |
| 8.3 细胞裂解与病毒成熟 | 第39页 |
| 8.4 盐抽提 | 第39页 |
| 8.5 假病毒纯化 | 第39-40页 |
| 9. 假病毒的滴定 | 第40页 |
| 10．待测血清中和抗体的检测 | 第40-42页 |
| 三、实验结果 | 第42-72页 |
| 1. 基于化学发光报告基因的高通量 HPV 中和抗体检测方法的建立及应用 | 第42-65页 |
| 1.1 化学发光报告基因的选择 | 第42-44页 |
| 1.2 假病毒感染试验及中和试验中细胞量的优化 | 第44-45页 |
| 1.3 中和试验中假病毒加入量的优化 | 第45-47页 |
| 1.4 中和试验中培养时间的确定 | 第47-48页 |
| 1.5 与经典 HPV 中和抗体检测方法的比较 | 第48-50页 |
| 1.6 Gluc 中和试验的检测灵敏度 | 第50-51页 |
| 1.7 GLuc 中和试验的特异性 | 第51-52页 |
| 1.8 Gluc 中和试验的重复性 | 第52-53页 |
| 1.9 Gluc 中和试验对临床免疫血清的检测 | 第53-57页 |
| 1.10 Gluc 中和试验对自然感染者样本的检测 | 第57-65页 |
| 2. 基于荧光蛋白的高通量 HPV 假病毒中和抗体检测方法的建立与标准化 | 第65-72页 |
| 2.1 EGFP 假病毒试验 Fluorospot 与 FACS 检测结果的相关性 | 第65-66页 |
| 2.2 EGFP 和 RFP 假病毒试验 Fluorospot 与 FACS 检测结果的相关性 | 第66-67页 |
| 2.3 Fluorospot 灵敏度设置值对检测结果的影响 | 第67-68页 |
| 2.4 EGFP-和 RFP-假病毒单独检测与混合检测的比较 | 第68-69页 |
| 2.5 双色荧光蛋白 HPV 假病毒中和抗体检测方法的重复性 | 第69-70页 |
| 2.6 双色荧光蛋白 HPV 假病毒中和抗体检测方法的初步应用 | 第70-72页 |
| 四、讨论 | 第72-77页 |
| 五、小结 | 第77-78页 |
| 第三章 人类免疫缺陷病毒假病毒检测体系的建立及应用 | 第78-114页 |
| 一、材料 | 第80-81页 |
| 1. 抗 HIV 药物 | 第80页 |
| 2. 细胞与质粒 | 第80页 |
| 3. 血浆样本 | 第80-81页 |
| 二、方法 | 第81-86页 |
| 1. 耐药性检测质粒的改造与构建 | 第81-82页 |
| 2. 假病毒的制备 | 第82-83页 |
| 2.1 耐药性检测假病毒制备 | 第82-83页 |
| 2.2 中和抗体检测假病毒的制备 | 第83页 |
| 3. 假病毒滴定 | 第83页 |
| 4. HIV 假病毒表型耐药性及中和抗体检测 | 第83-84页 |
| 5. 单基因扩增（single genomen amplication，SGA） | 第84页 |
| 6. 定点突变 | 第84-86页 |
| 三、结果 | 第86-110页 |
| 1.骨架质粒改造 | 第86-87页 |
| 2. 方法的优化 | 第87-93页 |
| 2.1 细胞量的选择 | 第87-89页 |
| 2.2 病毒量的选择 | 第89-91页 |
| 2.3 DEAE-dextran 加入量的选择 | 第91-93页 |
| 3. 方法重复性 | 第93页 |
| 4. 两种假病毒表型耐药性检测方法的比较 | 第93-99页 |
| 5. 假病毒膜蛋白对表型耐药性检测的影响 | 第99页 |
| 6. 抗病毒治疗失败的 HIV-1 感染者耐药性分析 | 第99-102页 |
| 7. HIV 假病毒在中和抗体表位分析中的应用 | 第102-110页 |
| 7.1 对 b12 敏感性不同假病毒膜蛋白序列分析 | 第102-104页 |
| 7.2 HPV-1 准种库对 b12 敏感性的差异 | 第104页 |
| 7.3 与 b12 敏感性相关的氨基酸位点的初步确定 | 第104-107页 |
| 7.4 b12 敏感性相关位点的定点突变分析 | 第107-110页 |
| 四、讨论 | 第110-113页 |
| 五、小结 | 第113-114页 |
| 结论 | 第114-116页 |
| 参考文献 | 第116-128页 |
| 作者简介 | 第128-130页 |
| 致谢 | 第130页 |
