| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 hrp基因及其编码的harpin蛋白的研究进展 | 第10-19页 |
| 1 植物病原菌的hrp基因及TTSS分泌系统 | 第10-11页 |
| 1.1 hrp基因簇的组成与功能 | 第10-11页 |
| 1.2 hrp基因编码的T3SE在病原菌和植物互作过程中的表达与调控 | 第11页 |
| 2 Harpin蛋白 | 第11-19页 |
| 2.1 Harpin蛋白的组成与结构特征 | 第12-13页 |
| 2.2 Harpin的生物学效应 | 第13-14页 |
| 2.2.1 使植物获得抗病性 | 第13-14页 |
| 2.2.2 增强植物抗虫性 | 第14页 |
| 2.2.3 使植物提高抗旱能力 | 第14页 |
| 2.2.4 促使植物生长 | 第14页 |
| 2.3 Harpin引发的防卫机制 | 第14-16页 |
| 2.3.1 Harpin诱导的SAR信号通路 | 第15页 |
| 2.3.2 Harpin启动的ET信号通路 | 第15页 |
| 2.3.3 Harpin启动ABA信号通路 | 第15-16页 |
| 2.3.4 Harpin诱导细胞产生过敏性死亡 | 第16页 |
| 2.4 Harpin的泌出系统和在植物上的互作位点 | 第16-17页 |
| 2.5 Harpin N-端研究进展 | 第17页 |
| 2.6 HpaXm的研究进展 | 第17-19页 |
| 第二章 转harpin基因植物概述 | 第19-21页 |
| 1 转基因工程的现状及应用 | 第19-20页 |
| 2 转harpin相关基因植物的研究现状 | 第20-21页 |
| 第三章 全长及缺失信号肽类似序列的hpaXm转基因烟草的培育及抗病性分析 | 第21-40页 |
| 1 材料和方法 | 第21-30页 |
| 1.1 目的基因的扩增及突变体的构建 | 第21-23页 |
| 1.1.1 供试菌株、质粒、引物和主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.1.2 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第22页 |
| 1.1.3 琼脂糖凝胶DNA片段回收 | 第22页 |
| 1.1.4 融合基因与pMD18-T载体连接 | 第22页 |
| 1.1.5 阳性重组转化子的检测 | 第22-23页 |
| 1.2 植物表达载体的构建 | 第23-25页 |
| 1.2.1 小量提取质粒 | 第23页 |
| 1.2.2 酶切 | 第23页 |
| 1.2.3 将目的基因连接到pBI121载体上 | 第23-24页 |
| 1.2.4 重组转化子的验证 | 第24页 |
| 1.2.5 农杆菌转化子的制备 | 第24-25页 |
| 1.2.6 转化子的鉴定 | 第25页 |
| 1.3 转基因烟草的产生 | 第25页 |
| 1.4 转基因烟草的分子鉴定 | 第25-27页 |
| 1.4.1 总DNA的提取及PCR检测 | 第25-26页 |
| 1.4.2 转基因烟草的Southern-Blot检测 | 第26页 |
| 1.4.3 总RNA的提取及RT-PCR扩增 | 第26-27页 |
| 1.5 转基因烟草可溶性蛋白的分析 | 第27-29页 |
| 1.5.1 提取转基因烟草可溶性蛋白 | 第28页 |
| 1.5.2 提取原核表达的hpaXm粗蛋白 | 第28页 |
| 1.5.3 带GST标签的hpaXm蛋白纯化 | 第28页 |
| 1.5.4 蛋白SDS-PAGE分析 | 第28-29页 |
| 1.6 Trypan blue染色检测过敏性细胞死亡 | 第29-30页 |
| 1.7 TMV的接种及抗病性分析 | 第30页 |
| 2 结果和分析 | 第30-38页 |
| 2.1 成功构建植物表达载体 | 第30-31页 |
| 2.2 目的基因整合到转基因烟草植株并正常表达 | 第31-33页 |
| 2.2.1 转基因烟草总DNA中PCR扩增出目的基因 | 第31-32页 |
| 2.2.2 靶基因已经整合到T1代转基因烟草的基因组中 | 第32页 |
| 2.2.3 在T1代转基因植株中RT-PCR扩增出目的基因 | 第32-33页 |
| 2.3 来自转基因烟草中的hpaXm及hpaXmALP能激发HR | 第33-34页 |
| 2.4 表达HpaXm及HpaXmΔLP的转基因植株具有微过敏反应现象 | 第34页 |
| 2.5 表达hpaXm和hpaXmΔLP的T1代转基因烟草具有对TMV的抗病性 | 第34-38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 HpaXm在转基因烟草中的作用位点 | 第40-46页 |
| 1 材料与方法 | 第40-41页 |
| 1.1 多克隆抗体的制备 | 第40页 |
| 1.2 免疫胶体金法 | 第40-41页 |
| 1.2.1 低温包埋转基因烟草叶片 | 第40-41页 |
| 1.2.2 包埋后免疫胶体金标记程序 | 第41页 |
| 2 结果和分析 | 第41-42页 |
| 2.1 多克隆抗体的制备及检测情况 | 第41页 |
| 2.2 电镜下观察免疫胶体金颗粒标记过的叶片组织 | 第41-42页 |
| 3 讨论 | 第42-46页 |
| 结论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 附录 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54页 |
