毛竹紫黄质脱环氧化酶基因的克隆与功能研究
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-26页 |
| ·引言 | 第13-23页 |
| ·研究背景 | 第13-14页 |
| ·国内外研究现状及评述 | 第14-23页 |
| ·研究的目标和主要内容 | 第23-25页 |
| ·关键的科学问题与研究目标 | 第23-24页 |
| ·主要研究内容 | 第24-25页 |
| ·研究技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-42页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·引物 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-42页 |
| ·毛竹实生苗的培育 | 第27-28页 |
| ·毛竹叶片叶绿素荧光测定 | 第28页 |
| ·毛竹叶片基因组DNA 提取（CTAB 法） | 第28页 |
| ·毛竹叶片总RNA 提取（Trizol 法） | 第28-29页 |
| ·cDNA 第一条链的合成 | 第29页 |
| ·基因保守片段克隆 | 第29-30页 |
| ·高保真酶Pyrobest 扩增反应和加A 反应 | 第30页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第30-31页 |
| ·目的片段和克隆载体的连接 | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌（DH5α）电击感受态制备 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA 的小量提取 | 第33页 |
| ·质粒酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·RACE-Ready cDNA 合成 | 第34页 |
| ·基因编码区克隆反应体系与条件 | 第34-35页 |
| ·基因5′端克隆反应体系与条件（5′RACE） | 第35页 |
| ·基因3′端克隆反应体系与条件（3′RACE） | 第35页 |
| ·目的基因基因组序列扩增体系与反应条件 | 第35-36页 |
| ·毛竹紫黄质脱环氧化酶成熟蛋白编码区序列的扩增 | 第36页 |
| ·原核表达载体构建 | 第36页 |
| ·原核表达载体转化重组表达菌株 | 第36-37页 |
| ·重组表达菌株的诱导表达 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE | 第37页 |
| ·蛋白表达的可溶性分析 | 第37-38页 |
| ·表达蛋白的纯化 | 第38页 |
| ·表达蛋白的活性鉴定 | 第38-39页 |
| ·毛竹叶片总蛋白提取 | 第39页 |
| ·多克隆抗体制备 | 第39-40页 |
| ·Western Blotting | 第40-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-59页 |
| ·毛竹叶片叶绿素荧光动力学研究 | 第42-43页 |
| ·毛竹紫黄质脱环氧化酶基因的克隆与序列分析 | 第43-51页 |
| ·保守区片段的克隆 | 第43-44页 |
| ·基因5′端的克隆 | 第44-45页 |
| ·基因3′端的克隆 | 第45-46页 |
| ·基因全长的获得及编码区的克隆 | 第46-48页 |
| ·基因组DNA 序列的克隆 | 第48-49页 |
| ·PeVDE 基因的系统进化树分析 | 第49-51页 |
| ·毛竹紫黄质脱环氧化酶的原核表达及其活性鉴定 | 第51-59页 |
| ·原核表达载体的构建和重组表达菌株的转化 | 第51-53页 |
| ·重组表达载体的诱导表达 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| ·重组蛋白的体外活性鉴定 | 第55-57页 |
| ·Western Blotting 结果分析 | 第57-59页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第59-64页 |
| ·结论 | 第59页 |
| ·讨论 | 第59-63页 |
| ·毛竹叶片叶绿素荧光动力学研究 | 第59-60页 |
| ·毛竹紫黄质脱环氧化酶基因的克隆与分析 | 第60-61页 |
| ·毛竹紫黄质脱环氧化酶的原核表达和功能鉴定 | 第61-63页 |
| ·展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 在读期间的学术研究 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
