| 摘要 | 第10-16页 |
| ABSTRACT | 第16-23页 |
| 第一章 猪流感病毒及其疫苗的研究进展 | 第24-46页 |
| 1 A型流感病毒分子生物学特性 | 第24-27页 |
| 1.1 A型流感病毒的基本特性 | 第24-25页 |
| 1.2 A型流感病毒基因组结构及编码的蛋白功能 | 第25-26页 |
| 1.3 A型流感病毒的基因分型 | 第26-27页 |
| 2 猪流感的危害 | 第27-29页 |
| 2.1 猪流感对养殖业的危害 | 第27-28页 |
| 2.1.1 猪流感发病特点、临床症状及病理变化 | 第27-28页 |
| 2.1.2 猪流感易继发多种疾病 | 第28页 |
| 2.2 猪流感的公共卫生意义 | 第28-29页 |
| 3 猪流感疫苗研究进展 | 第29-35页 |
| 3.1 灭活疫苗 | 第30-31页 |
| 3.2 减毒疫苗 | 第31-32页 |
| 3.3 DNA疫苗 | 第32-33页 |
| 3.4 重组活载体疫苗 | 第33-34页 |
| 3.5 单位疫苗 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-46页 |
| 第二章 H1N1亚型SIV重HAl蛋白IELISA方法的建立 | 第46-66页 |
| 1 材料与方法 | 第47-53页 |
| 1.1 质粒、菌株、血清 | 第47页 |
| 1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 1.3 HAl基因设计合成及pET28b(+)-H1HA1质粒的构建 | 第47-48页 |
| 1.4 原核表达质粒pET28b(+)-H1HA1的鉴定 | 第48页 |
| 1.4.1 PCR鉴定 | 第48页 |
| 1.4.2 酶切鉴定 | 第48页 |
| 1.4.3 测序鉴定 | 第48页 |
| 1.5 重组蛋白的表达,纯化及抗原性鉴定 | 第48-51页 |
| 1.5.1 质粒pET28b(+)-H1HA1转化感受态大肠杆菌BL21 | 第48-49页 |
| 1.5.2 重组蛋白表达条件的优化 | 第49-50页 |
| 1.5.3 重组蛋白的Western blot鉴定 | 第50页 |
| 1.5.4 重组蛋白的大量表达 | 第50-51页 |
| 1.5.5 重组蛋白包涵体的纯化 | 第51页 |
| 1.6 猪流感(H1N1)iELISA抗体检测方法的建立 | 第51-53页 |
| 1.6.1 间接ELISA试验最佳条件的选择 | 第51-52页 |
| 1.6.2 临界值确定 | 第52页 |
| 1.6.3 特异性试验 | 第52页 |
| 1.6.4 重复性试验 | 第52-53页 |
| 1.6.5 临床血清样品检测 | 第53页 |
| 2 结果 | 第53-60页 |
| 2.1 重组表达质粒pET 28b(+)-H1HA1的鉴定结果 | 第53页 |
| 2.2 重组表达菌的诱导表达与重组HA1蛋白的纯化 | 第53-55页 |
| 2.3 Western-blot | 第55页 |
| 2.4 间接ELISA检测方法的建立 | 第55-60页 |
| 2.4.1 间接ELISA试验条件的优化 | 第55-58页 |
| 2.4.2 临界值确定 | 第58页 |
| 2.4.3 特异性试验 | 第58-59页 |
| 2.4.4 重复性实验 | 第59页 |
| 2.4.5 临床血清样品检测 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 第三章 H3N2亚型SIV重HA1蛋白IELISA方法的建立 | 第66-84页 |
| 1 材料与方法 | 第67-71页 |
| 1.1 质粒、菌株、血清 | 第67页 |
| 1.2 主要试剂 | 第67-68页 |
| 1.3 HAl基因设计合成及pET28b(+)-H3HA1质粒的构建 | 第68页 |
| 1.4 原核表达质粒pET28b(+)-H3HA1的鉴定 | 第68-69页 |
| 1.5 重组蛋白的表达,纯化及抗原性鉴定 | 第69页 |
| 1.5.1 质粒pET28b(+)-H3HA1转化感受态大肠杆菌BL21 | 第69页 |
| 1.5.2 重组表达菌的IPTG诱导表达 | 第69页 |
| 1.5.3 重组HA1蛋白的Western-blot鉴定 | 第69页 |
| 1.5.4 重组蛋白的大量表达 | 第69页 |
| 1.5.5 重组蛋白包涵体的纯化 | 第69页 |
| 1.6 猪流感(H3N2)iELISA抗体检测方法的建立 | 第69-71页 |
| 1.6.1 间接ELISA试验最佳条件的选择 | 第69-70页 |
| 1.6.2 临界值确定 | 第70页 |
| 1.6.3 特异性试验 | 第70页 |
| 1.6.4 重复性试验 | 第70-71页 |
| 1.6.5 临床血清样品检测 | 第71页 |
| 2 结果 | 第71-78页 |
| 2.1 原核表达质粒pET28b(+)-H3HA1的鉴定 | 第71-72页 |
| 2.2 重组菌的诱导表达与重组HA1蛋白的纯化 | 第72-73页 |
| 2.3 Western-blot | 第73页 |
| 2.4 间接ELISA检测方法的建立 | 第73-78页 |
| 2.4.1 间接ELISA试验条件的优化 | 第73-76页 |
| 2.4.2 临界值确定 | 第76页 |
| 2.4.3 特异性试验 | 第76-77页 |
| 2.4.4 重复性实验 | 第77-78页 |
| 2.4.5 临床血清样品检测 | 第78页 |
| 3 讨论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 第四章 表达H1N1 HA1重组猪痘病毒的构建与免疫原性分析 | 第84-114页 |
| 1 材料与方法 | 第86-94页 |
| 1.1 材料 | 第86-87页 |
| 1.2 方法 | 第87-94页 |
| 1.2.1 猪流感H1N1 HA1基因PCR扩增 | 第87页 |
| 1.2.2 猪流感H1N1 HA1重组猪痘病毒转移载体的构建与鉴定 | 第87-89页 |
| 1.2.3 感染与转染 | 第89页 |
| 1.2.4 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H1的纯化与鉴定 | 第89-90页 |
| 1.2.5 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H1的滴度测定 | 第90页 |
| 1.2.6 动物试验 | 第90-94页 |
| 1.2.7 统计学分析 | 第94页 |
| 2 结果 | 第94-106页 |
| 2.1 猪流感H1N1 HA1基因PCR扩增 | 第94页 |
| 2.2 猪流感H1N1 HA1重组猪痘病毒转移载体pUSZ11/H1的构建与鉴定 | 第94-95页 |
| 2.3 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H1纯化和PCR鉴定 | 第95-96页 |
| 2.4 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H1表达鉴定 | 第96页 |
| 2.5 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H1滴度 | 第96页 |
| 2.6 小鼠的免疫学试验 | 第96-99页 |
| 2.6.1 iELISA抗体 | 第96-97页 |
| 2.6.2 中和抗体 | 第97-98页 |
| 2.6.3 SIV(H1N1)特异的淋巴细胞增殖检测 | 第98页 |
| 2.6.4 SIV(H1N1)刺激小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第98-99页 |
| 2.7 豚鼠免疫保护试验 | 第99-102页 |
| 2.7.1 SIV(H1N1)刺激豚鼠外周血淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第99页 |
| 2.7.2 豚鼠肺组织病理变化观察 | 第99-100页 |
| 2.7.3 豚鼠免疫保护试验 | 第100-102页 |
| 2.8 猪体攻毒保护试验 | 第102-106页 |
| 2.8.1 攻毒后体温测量结果 | 第102页 |
| 2.8.2 攻毒后鼻腔排毒情况测量结果 | 第102-103页 |
| 2.8.3 SIV(H1N1)刺激猪外周血淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第103-104页 |
| 2.8.4 猪肺组织病理变化观察 | 第104页 |
| 2.8.5 猪体攻毒保护试验 | 第104-106页 |
| 3 讨论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-114页 |
| 第五章 表达H3N2 HA1重组猪痘病毒的构建与免疫原性分析 | 第114-140页 |
| 1 材料与方法 | 第116-122页 |
| 1.1 材料 | 第116页 |
| 1.2 方法 | 第116-122页 |
| 1.2.1 猪流感H3N2 HA1基因PCR扩增 | 第116-117页 |
| 1.2.2 猪流感H3N2 HA1重组猪痘病毒转移载体的构建与鉴定 | 第117-118页 |
| 1.2.3 感染与转染 | 第118页 |
| 1.2.4 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H3的纯化与鉴定 | 第118-119页 |
| 1.2.5 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H3的滴度测定 | 第119页 |
| 1.2.6 动物试验 | 第119-121页 |
| 1.2.7 统计学分析 | 第121-122页 |
| 2 结果 | 第122-134页 |
| 2.1 猪流感H3N2 HA1基因PCR扩增 | 第122页 |
| 2.2 猪流感H3N2 HA1重组猪痘病毒转移载体pUSZ11/H3的构建与鉴定 | 第122-123页 |
| 2.3 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H3纯化和PCR鉴定 | 第123页 |
| 2.4 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H3表达鉴定 | 第123-124页 |
| 2.5 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H3滴度 | 第124页 |
| 2.6 小鼠的免疫学试验 | 第124-127页 |
| 2.6.1 iELISA抗体 | 第124-125页 |
| 2.6.2 中和抗体 | 第125页 |
| 2.6.3 SIV H3N2特异的淋巴细胞增殖试验检测结果 | 第125-126页 |
| 2.6.4 SIV H3N2刺激小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第126-127页 |
| 2.7 豚鼠免疫保护试验 | 第127-130页 |
| 2.7.1 SIV H3N2刺激豚鼠外周血淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第127页 |
| 2.7.2 豚鼠肺脏组织病理变化观察 | 第127-128页 |
| 2.7.3 豚鼠免疫保护试验 | 第128-130页 |
| 2.8 猪体攻毒保护试验 | 第130-134页 |
| 2.8.1 攻毒后体温测量结果 | 第130页 |
| 2.8.2 攻毒后鼻腔排毒情况测量结果 | 第130-131页 |
| 2.8.3 SIV H3N2刺激猪外周血淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第131页 |
| 2.8.4 猪肺组织病理变化观察 | 第131-132页 |
| 2.8.5 猪体攻毒保护试验 | 第132-134页 |
| 3 讨论 | 第134-135页 |
| 参考文献 | 第135-140页 |
| 第六章 串联表达H3和H1型HA1重组猪痘病毒的构建与免疫原性分析 | 第140-170页 |
| 1 材料与方法 | 第142-147页 |
| 1.1 材料 | 第142页 |
| 1.2 方法 | 第142-147页 |
| 1.2.1 H3-2A-H1基因合成及猪痘病毒转移载体pUSZ11/H3-2A-H1构建、鉴定 | 第142-143页 |
| 1.2.2 感染与转染 | 第143页 |
| 1.2.3 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H3-2A-H1的纯化与鉴定 | 第143-144页 |
| 1.2.4 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H3-2A-H1的滴度测定 | 第144页 |
| 1.2.5 动物试验 | 第144-147页 |
| 1.2.6 统计学分析 | 第147页 |
| 2 结果 | 第147-162页 |
| 2.1 猪流感(H3N2和H1N1)HA1重组猪痘病毒转移载体pUSZ11/H3-2A-H1的构建与鉴定 | 第147-148页 |
| 2.2 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H3-2A-H1纯化和PCR鉴定 | 第148页 |
| 2.3 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H3-2A-H1表达鉴定 | 第148-150页 |
| 2.4 猪流感重组猪痘病毒rSPV/H3-2A-H1滴度 | 第150页 |
| 2.5 小鼠的免疫学试验 | 第150-154页 |
| 2.5.1 iELISA抗体 | 第150-151页 |
| 2.5.2 中和抗体 | 第151-152页 |
| 2.5.3 SIV特异的淋巴细胞增殖检测 | 第152-153页 |
| 2.5.4 SIV刺激小鼠脾淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第153-154页 |
| 2.6 豚鼠免疫保护试验 | 第154-158页 |
| 2.6.1 SIV刺激豚鼠外周血淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第154-156页 |
| 2.6.2 豚鼠肺脏组织病理变化观察 | 第156-157页 |
| 2.6.3 豚鼠免疫保护试验 | 第157-158页 |
| 2.7 猪体攻毒保护试验 | 第158-162页 |
| 2.7.1 攻毒后体温测量结果 | 第158页 |
| 2.7.2 攻毒后鼻腔排毒情况测量结果 | 第158-159页 |
| 2.7.3 SIV刺激猪外周血淋巴细胞分泌细胞因子检测 | 第159-160页 |
| 2.7.4 猪肺组织病理变化观察 | 第160-161页 |
| 2.7.5 猪体攻毒保护试验 | 第161-162页 |
| 3 讨论 | 第162-163页 |
| 参考文献 | 第163-170页 |
| 全文总结 | 第170-172页 |
| 致谢 | 第172-174页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第174页 |
