| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 第一部分 甘草总RNA中目标miRNA基因扩增鉴定 | 第15-22页 |
| 引言 | 第15页 |
| 1 材料 | 第15-16页 |
| 1.1 样本 | 第15页 |
| 1.2 试剂 | 第15页 |
| 1.3 仪器 | 第15-16页 |
| 2 方法 | 第16-19页 |
| 2.1 新鲜甘草根茎总RNA的提取 | 第16-17页 |
| 2.2 目标mi RNA的RT-PCR鉴定 | 第17-18页 |
| 2.3 人外周血淋巴细胞（PBMC）分离 | 第18-19页 |
| 3 结果 | 第19-20页 |
| 3.1 甘草总RNA提取 | 第19页 |
| 3.2 目标mi RNA基因扩增鉴定 | 第19-20页 |
| 4 小结 | 第20-22页 |
| 第二部分 甘草miRNA mimic对免疫细胞的影响研究 | 第22-41页 |
| 引言 | 第22页 |
| 1 材料 | 第22-23页 |
| 1.1 样本 | 第22页 |
| 1.2 试剂 | 第22页 |
| 1.3 仪器 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-28页 |
| 2.1 FAM标记的小分子DNA转染进PBMC | 第23页 |
| 2.2 实验标本的收集 | 第23页 |
| 2.3 人外周血单个淋巴细胞（PBMC）分离 | 第23-24页 |
| 2.4 CIK细胞的诱导培养 | 第24页 |
| 2.5 JURKAT细胞的复苏培养 | 第24页 |
| 2.6 甘草miRNA mimic制备 | 第24-25页 |
| 2.7 甘草miRNA mimic转染 | 第25页 |
| 2.8 细胞总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.9 RT-PCR反应 | 第26-28页 |
| 3 结果 | 第28-39页 |
| 3.0 Lip2000转染效率鉴定 | 第28-30页 |
| 3.1 甘草miRNA对PBMC、CIK、JURKAT细胞形态学的影响 | 第30-32页 |
| 3.2 甘草miRNA对PBMC、CIK、JURKAT细胞增殖的影响 | 第32-33页 |
| 3.3 甘草miRNA对PBMC、CIK、JURKAT细胞表达免疫相关基因的影响 | 第33-39页 |
| 4 小结 | 第39-41页 |
| 第三部分 甘草miRNA对人免疫细胞基因表达谱的影响 | 第41-62页 |
| 引言 | 第41页 |
| 1 材料 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-44页 |
| 2.0 建库测序流程 | 第41-42页 |
| 2.1 样品质量检测 | 第42页 |
| 2.2 文库构建及库检 | 第42-43页 |
| 2.3 文库构建及库检 | 第43页 |
| 2.4 信息分析流程 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-60页 |
| 3.1 RNA质量检测结果 | 第44-46页 |
| 3.2 四种碱基含量分布检查 | 第46-47页 |
| 3.3 测序数据质量统计 | 第47页 |
| 3.4 Reads比对到参考序列 | 第47-50页 |
| 3.5 基因表达水平分析 | 第50-52页 |
| 3.6 KEGG富集分析 | 第52-55页 |
| 3.7 差异基因GO富集分析 | 第55-60页 |
| 4 小结 | 第60-62页 |
| 第四部分 利用Real-time PCR及Western-blotting对表达谱结果进行验证 | 第62-84页 |
| 引言 | 第62页 |
| 1 材料 | 第62-65页 |
| 1.1 样本 | 第62页 |
| 1.2 试剂 | 第62页 |
| 1.3 仪器 | 第62-63页 |
| 1.4 主要溶液的配制 | 第63-65页 |
| 2 方法 | 第65-72页 |
| 2.1 Real-time PCR检测差异基因表达的影响 | 第65-68页 |
| 2.2 Western blotting检测差异基因对应的蛋白表达的影响 | 第68-72页 |
| 3 结果 | 第72-81页 |
| 3.1 Real-time PCR检测差异基因在不同处理组中的表达量 | 第72-78页 |
| 3.2 Real-time PCR验证PBMC相关免疫基因的表达情况 | 第78-80页 |
| 3.3 Western-blotting检测差异基因所对应的蛋白表达量 | 第80-81页 |
| 4 小结 | 第81-84页 |
| 讨论 | 第84-87页 |
| 参考文献 | 第87-93页 |
| 附录一 英文缩略词表 | 第93-94页 |
| 附录二 攻读学位期间发表的论文 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
