| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 名词缩写 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-20页 |
| 一. 灵芝及其药用价值 | 第12页 |
| 二. 灵芝三萜的发现和研究进展 | 第12-13页 |
| 三. 三萜类化合物合成的途径的研究进展 | 第13-15页 |
| 四. 异戊二烯焦磷酸异构酶的发现及研究进展 | 第15-19页 |
| 1 异戊二烯焦磷酸异构酶的克隆及分类 | 第15-16页 |
| 2 异戊二烯焦磷酸异构酶的催化反应 | 第16页 |
| 3 异戊二烯焦磷酸异构酶的结构分析及催化机制 | 第16-18页 |
| 4 关于异戊二烯焦磷酸异构酶抑制剂的研究 | 第18-19页 |
| 五. 本课题的研究意义 | 第19-20页 |
| 第二章 灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶基因的克隆及功能验证 | 第20-48页 |
| 第一节 灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶基因的克隆 | 第20-36页 |
| 1 实验材料 | 第20页 |
| ·菌株和质粒 | 第20页 |
| ·试剂 | 第20页 |
| 2 实验方法 | 第20-30页 |
| ·灵芝基因组DNA的提取(CTAB法) | 第20-21页 |
| ·序列比较和异戊二烯焦磷酸异构酶基因特异片段简并引物的设计 | 第21-22页 |
| ·异戊二烯焦磷酸异构酶基因特异片段的PCR扩增 | 第22-23页 |
| ·扩增片段的回收、克隆 | 第23-24页 |
| ·异戊二烯焦磷酸异构酶基因组DNA5'端的获得 | 第24-26页 |
| ·灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶基因cDNA3'端和3'UTR的获得 | 第26-29页 |
| ·异戊二烯焦磷酸异构酶基因组序列全长的获得 | 第29页 |
| ·异戊二烯焦磷酸异构酶cDNA全长的获得 | 第29-30页 |
| 3 结果与讨论 | 第30-36页 |
| ·idi1基因特异片段的克隆及测序结果 | 第30-31页 |
| ·灵芝idi1基因组DNA5'端及启动子区的获得 | 第31-32页 |
| ·灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶基因cDNA3'端序列的获得 | 第32-33页 |
| ·灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶基因组全长的获得 | 第33页 |
| ·灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶cDNA全长的获得 | 第33-36页 |
| 第二节 灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶相关的生物信息学分析 | 第36-41页 |
| 1 分析所用到的一些软件来源 | 第36页 |
| 2 结果与讨论 | 第36-41页 |
| ·灵芝IDI1蛋白质分子量及等电点预测 | 第36页 |
| ·灵芝IDI1结构域预测 | 第36-37页 |
| ·灵芝IDI1蛋白3D结构预测 | 第37-38页 |
| ·灵芝idi11基因的系统发生树分析 | 第38页 |
| ·灵芝idi1基因的启动子分析 | 第38-41页 |
| 第三节 灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶的功能验证 | 第41-48页 |
| 1 原理 | 第41页 |
| 2 实验材料 | 第41页 |
| ·菌株 | 第41页 |
| ·试剂 | 第41页 |
| ·质粒 | 第41页 |
| 3 实验方法 | 第41-45页 |
| ·原核表达载体pTrcGlIPI质粒的构建 | 第41-45页 |
| ·pTrc空载体的构建 | 第45页 |
| ·产β-胡萝卜素工程菌的构建 | 第45页 |
| ·颜色互补平板的获得 | 第45页 |
| 4 结果与讨论 | 第45-48页 |
| ·pTrcGlIPI重组质粒酶切验证 | 第45-46页 |
| ·灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶大肠杆菌颜色互补 | 第46-48页 |
| 第三章 灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶表达特性的研究 | 第48-52页 |
| 1 实验材料 | 第48页 |
| ·菌株 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| 2 试验方法 | 第48-50页 |
| ·灵芝菌丝体的培养 | 第48-49页 |
| ·RNA的提取和cDNA的获得 | 第49页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·内参基因gpd的扩增 | 第49页 |
| ·检测基因idi1在mRNA水平的表达差异 | 第49-50页 |
| 3 结果与讨论 | 第50-52页 |
| ·灵芝idi1基因在菌丝不同发育阶段RNA水平 | 第50-51页 |
| ·灵芝idi1基因对MeJA的响应 | 第51-52页 |
| 第四章 灵芝异戊二烯焦磷酸异构酶原核表达和蛋白纯化 | 第52-58页 |
| 1 实验材料 | 第52页 |
| ·菌株和质粒 | 第52页 |
| ·试剂 | 第52页 |
| 2 试验方法 | 第52-55页 |
| ·表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·IDI1蛋白的诱导表达 | 第53-54页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第54页 |
| ·异戊二烯焦磷酸异构酶蛋白纯化 | 第54-55页 |
| 3 结果与讨论 | 第55-58页 |
| 全文总结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
