| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-30页 |
| 1.1 溶菌雜简介 | 第14-19页 |
| 1.1.1 溶菌酶的空间结构及其理化性质 | 第14-15页 |
| 1.1.1.1 溶菌酶的结构 | 第14页 |
| 1.1.1.2 溶菌酶的理化性质 | 第14-15页 |
| 1.1.2 溶菌酶的生物学功能 | 第15-16页 |
| 1.1.3 溶菌酶的分类 | 第16-19页 |
| 1.1.3.1 c型溶菌酶 | 第16-17页 |
| 1.1.3.2 g型溶菌酶 | 第17页 |
| 1.1.3.3 噬菌体溶菌酶 | 第17页 |
| 1.1.3.4 植物溶菌酶 | 第17页 |
| 1.1.3.5 真菌与细菌溶菌酶 | 第17-18页 |
| 1.1.3.6 i型溶菌酶 | 第18-19页 |
| 1.2 溶菌酶的应用 | 第19-24页 |
| 1.2.1 溶菌酶在食品工业中的应用 | 第19-21页 |
| 1.2.1.1 溶菌酶在乳制品中的应用 | 第19页 |
| 1.2.1.2 溶菌酶在肉产品中的应用 | 第19-20页 |
| 1.2.1.3 溶菌酶在饮料中的应用 | 第20页 |
| 1.2.1.4 溶菌酶在发酵食品中的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.1.5 溶菌酶在其它食品中的应用 | 第21页 |
| 1.2.2 溶菌酶在畜牧业中的应用 | 第21-22页 |
| 1.2.2.1 用作饲料防腐剂和杀菌剂 | 第21页 |
| 1.2.2.3 用于防治畜禽疾病 | 第21-22页 |
| 1.2.2.4 直接添加于饲料中替代抗生素 | 第22页 |
| 1.2.2.5 在水产养殖业中的应用 | 第22页 |
| 1.2.3 溶菌酶在医学上的应用 | 第22-24页 |
| 1.2.3.1 在疾病预防方面的应用 | 第22-23页 |
| 1.2.3.2 在医疗疾病中的应用 | 第23页 |
| 1.2.3.3 溶菌酶在疾病诊断方面的应用 | 第23-24页 |
| 1.3 海洋动物溶菌酶基因工程的研究进展 | 第24页 |
| 1.4 目的基因在原核细胞中的表达 | 第24-26页 |
| 1.5 海参溶菌酶的应用前景 | 第26页 |
| 1.6 研究的主要内容、目的、意义和技术路线 | 第26-30页 |
| 1.6.1 研究的主要内容 | 第26-27页 |
| 1.6.2 研究的主要目的 | 第27页 |
| 1.6.3 研究的主要意义 | 第27-28页 |
| 1.6.4 技术路线 | 第28-30页 |
| 1.6.4.1 目的基因的克隆 | 第28-29页 |
| 1.6.4.2 目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第29页 |
| 1.6.4.3 重组蛋白的纯化及抑菌活性测定 | 第29页 |
| 1.6.4.4 生物信息学分析目的基因 | 第29-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-57页 |
| 2.1 目的基因的克隆与序列分析 | 第30-44页 |
| 2.1.1 材料与仪器 | 第30-32页 |
| 2.1.1.1 海刺参组织 | 第30页 |
| 2.1.1.2 菌株与质粒 | 第30页 |
| 2.1.1.3 特异引物 | 第30页 |
| 2.1.1.4 主要试剂 | 第30页 |
| 2.1.1.5 培养基 | 第30-31页 |
| 2.1.1.6 常用溶液及缓冲液 | 第31-32页 |
| 2.1.1.7 主要仪器和设备 | 第32页 |
| 2.1.2 方法与步骤 | 第32-44页 |
| 2.1.2.1 引物的设计 | 第32-33页 |
| 2.1.2.2 海参体壁总RNA的提取 | 第33-34页 |
| 2.1.2.3 目的基因RT-PCR的扩增 | 第34-37页 |
| 2.1.2.4 低熔点琼脂糖凝胶电泳回收PCR产物 | 第37-38页 |
| 2.1.2.5 载体与目的基因的连接及转化大肠杆菌DH5α | 第38-39页 |
| 2.1.2.6 重组克隆质粒的菌落PCR鉴定 | 第39-41页 |
| 2.1.2.7 质粒提取与酶切鉴定 | 第41-44页 |
| 2.2 目的基因在大肠杆菌中的表达研究 | 第44-54页 |
| 2.2.1 材料和试剂 | 第44-48页 |
| 2.2.1.1 质粒和菌种 | 第44页 |
| 2.2.1.2 酶和试剂 | 第44-45页 |
| 2.2.1.3 蛋白质电泳的溶液及缓冲液 | 第45-46页 |
| 2.2.1.4 重组蛋白纯化及处理的溶液及缓冲液 | 第46页 |
| 2.2.1.5 Western Blotting缓冲液 | 第46-47页 |
| 2.2.1.6 主要设备仪器 | 第47-48页 |
| 2.2.2 重组表达载体的构建 | 第48-50页 |
| 2.2.2.1 质粒pET32a(+)与目的片段的酶切与回收 | 第48-49页 |
| 2.2.2.2 连接与转化 | 第49-50页 |
| 2.2.3 rSjLys、rSjLys-N和rSjLys-C最佳表达条件的确立 | 第50页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE电泳技术 | 第50-51页 |
| 2.2.5 Western blotting分析鉴定rSjLys、rSjLys-N和rSjLys-C | 第51-52页 |
| 2.2.5.1 SDS-PAGE电泳 | 第51页 |
| 2.2.5.2 Western Blotting分析 | 第51-52页 |
| 2.2.6 rSjLys、rSjLys-N和rSjLys-C的纯化 | 第52-53页 |
| 2.2.7 透析纯化rSjLys、rSjLys-N和rSjLys-C | 第53-54页 |
| 2.2.8 蛋白含量测定 | 第54页 |
| 2.3 重组蛋白的体外活性测定 | 第54-55页 |
| 2.3.1 菌种 | 第54页 |
| 2.3.2 重组蛋白的抑菌活性测定 | 第54-55页 |
| 2.3.2.1 指示菌浓度的确定 | 第55页 |
| 2.3.2.2 rSjLys、rSjLys-N及rSjLys-C抑菌实验 | 第55页 |
| 2.4 生物信息学方法对海参溶菌酶基因的分析 | 第55-57页 |
| 2.4.1 生物信息学对目的基因表达蛋白的可溶性分析 | 第55-56页 |
| 2.4.2 生物信息学对目的基因表达蛋白的空间结构分析 | 第56-57页 |
| 第三章 结果及分析 | 第57-82页 |
| 3.1 海参溶菌酶目的基因的克隆分析 | 第57-65页 |
| 3.1.1 海参总RNA分析 | 第57页 |
| 3.1.2 RT-PCR扩增目的基因 | 第57-59页 |
| 3.1.3 目的基因的回收与纯化 | 第59-60页 |
| 3.1.4 重组克隆质粒的菌落PCR验证 | 第60-62页 |
| 3.1.5 重组克隆质粒的双酶切验证 | 第62-65页 |
| 3.2 海参溶菌酶及多肽基因SjLys、SjLys-N和SjLys-C的表达分析 | 第65-75页 |
| 3.2.1 重组表达质粒双酶切鉴定 | 第65-69页 |
| 3.2.2 rSjLys、SjLys-N及SjLys-C在大肠杆菌的诱导表达和纯化 | 第69-72页 |
| 3.2.3 rSjLys、rSjLys-N和rSjLys-C的Western blotting分析 | 第72-74页 |
| 3.2.4 蛋白质含量的标准曲线 | 第74-75页 |
| 3.3 重组蛋白抑菌活力的测定 | 第75-77页 |
| 3.4 海参溶菌酶基因的生物信息学分析 | 第77-82页 |
| 3.4.1 生物信息学方法对目的基因表达的可溶性分析 | 第77-80页 |
| 3.4.2 生物信息学方法对目的基因表达蛋白的空间结构分析 | 第80-82页 |
| 第四章 讨论 | 第82-84页 |
| 第五章 结论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
| 附录A | 第93-95页 |
| 附录B | 第95-97页 |
| 附录C | 第97-98页 |
