| 中文摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3页 |
| 中文文摘 | 第4-7页 |
| 目录 | 第7-11页 |
| 绪论 | 第11-25页 |
| 1 环庚三烯酚酮(tropolone)类化合物的研究进展 | 第11-22页 |
| 1.1 天然的环庚三烯酚酮 | 第12-15页 |
| 1.1.1 只有一个环庚三烯酚酮环的化合物 | 第12-13页 |
| 1.1.2 具有复杂多环的环庚三烯酚酮类化合物 | 第13页 |
| 1.1.3 含有氮元素的环庚三烯酚酮类化合物 | 第13-15页 |
| 1.2 环庚三烯酚酮类化合物的生物活性 | 第15-18页 |
| 1.2.1 抑菌作用 | 第16页 |
| 1.2.2 酶抑制剂 | 第16-17页 |
| 1.2.3 抗肿瘤活性 | 第17-18页 |
| 1.3 环庚三烯酚酮类化合物结构与功能的关系 | 第18-19页 |
| 1.4 环庚三烯酚酮类化合物的合成 | 第19-22页 |
| 1.4.1 化学合成 | 第19-20页 |
| 1.4.2 生物合成途径 | 第20-22页 |
| 2 rubrolone简介 | 第22-24页 |
| 2.1 rubrolone的发现 | 第22页 |
| 2.2 rubrolone的化学结构特征 | 第22-23页 |
| 2.3 rubrolone的理化特征 | 第23页 |
| 2.4 rubrolone的研究意义 | 第23-24页 |
| 3 本课题的研究内容与目标 | 第24-25页 |
| 第一章 链霉菌Streptomyces echinoruber sp.nov的发酵及其代谢产物的分离纯化 | 第25-39页 |
| 第一节 材料与方法 | 第25-30页 |
| 1.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 1.1.1 培养基 | 第25页 |
| 1.1.2 化学试剂 | 第25-26页 |
| 1.1.3 实验菌株 | 第26页 |
| 1.1.4 16S rRNA通用引物 | 第26页 |
| 1.2 实验方法 | 第26-30页 |
| 1.2.1 真空冷冻干燥链霉菌菌种的恢复培养 | 第26-27页 |
| 1.2.2 小量提取链霉菌的总DNA | 第27页 |
| 1.2.3 琼脂糖凝胶DNA片段的回收 | 第27-28页 |
| 1.2.4 链霉菌及大肠杆菌的短期保藏方法 | 第28页 |
| 1.2.5 大肠杆菌感受态的制备 | 第28-29页 |
| 1.2.6 质粒转化大肠杆菌 | 第29页 |
| 1.2.7 大肠杆菌质粒的提取 | 第29-30页 |
| 第二节 实验内容 | 第30-32页 |
| 2.1 菌株鉴定 | 第30页 |
| 2.2 固体发酵链霉菌 | 第30页 |
| 2.3 液体发酵链霉菌 | 第30-31页 |
| 2.4 对发酵产物的分离纯化 | 第31-32页 |
| 2.5 LC-MS(液质联用)检测 | 第32页 |
| 第三节 实验结果与分析 | 第32-38页 |
| 3.1 菌株鉴定 | 第32-34页 |
| 3.2 固体发酵产物的检测与分析 | 第34-36页 |
| 3.2.1 固体发酵 | 第34-35页 |
| 3.2.2 分离纯化 | 第35页 |
| 3.2.3 LC-MS(液质联用)检测 | 第35-36页 |
| 3.3 液体发酵产物的结果与分析 | 第36-38页 |
| 第四节 小结 | 第38-39页 |
| 第二章 rubrolone生物合成基因簇的挖掘 | 第39-73页 |
| 第一节 实验材料 | 第39-42页 |
| 1.1 培养基 | 第39页 |
| 1.2 化学试剂 | 第39-40页 |
| 1.3 实验菌株 | 第40-41页 |
| 1.4 本实验使用的主要仪器 | 第41页 |
| 1.5 本实验所用的PCR引物 | 第41-42页 |
| 第二节 实验方法 | 第42-55页 |
| 2.1 构建基因组文库 | 第42-47页 |
| 2.1.1 发酵链霉菌 | 第42页 |
| 2.1.2 提取基因组 | 第42-43页 |
| 2.1.3 基因组的片段化 | 第43页 |
| 2.1.4 割胶回收 | 第43-44页 |
| 2.1.5 载体DNA的制备 | 第44-45页 |
| 2.1.6 体外连接和包装 | 第45-46页 |
| 2.1.7 感受态细胞的准备 | 第46页 |
| 2.1.8 滴度测定 | 第46-47页 |
| 2.1.9 fosmid文库涂布 | 第47页 |
| 2.2 筛选基因组文库 | 第47-49页 |
| 2.2.1 逐板筛选 | 第47-48页 |
| 2.2.2 逐行筛选 | 第48页 |
| 2.2.3 逐个筛选 | 第48页 |
| 2.2.4 筛选的cosmid归类 | 第48-49页 |
| 2.3 异源表达 | 第49-51页 |
| 2.3.1 制备原生质体 | 第49-50页 |
| 2.3.2 原生质体转化 | 第50-51页 |
| 2.3.3 转化子产物的处理 | 第51页 |
| 2.4 基因敲除 | 第51-55页 |
| 2.4.1 敲除载体的构建 | 第51-53页 |
| 2.4.2 接合转移 | 第53-55页 |
| 第三节 实验结果与分析 | 第55-72页 |
| 3.1 基因文库的构建 | 第55-57页 |
| 3.1.1 基因组的提取结果 | 第55页 |
| 3.1.2 基因组片段化的结果 | 第55-56页 |
| 3.1.3 割胶回收的结果 | 第56-57页 |
| 3.1.4 滴度测定结果 | 第57页 |
| 3.2 基因文库的筛选 | 第57-67页 |
| 3.2.1 逐板筛选的结果 | 第59-60页 |
| 3.2.2 逐行筛选的结果 | 第60-62页 |
| 3.2.3 逐个筛选的结果 | 第62-66页 |
| 3.2.4 cosmid分类结果 | 第66-67页 |
| 3.3 异源表达 | 第67-68页 |
| 3.3.1 异源表达结果与分析 | 第67-68页 |
| 3.3.2 LC-MS检测结果与分析 | 第68页 |
| 3.4 基因敲除 | 第68-72页 |
| 3.4.1 敲除载体的构建 | 第68-71页 |
| 3.4.2 接合转移 | 第71-72页 |
| 第四节 小结 | 第72-73页 |
| 第三章 链霉菌Streptomyces echinoruber sp.nov基因组序列分析 | 第73-87页 |
| 第一节 基因组测序及orf预测 | 第73-82页 |
| 第二节 几个重要基因的生物信息学分析 | 第82-87页 |
| 2.1 orf33的分析 | 第83-84页 |
| 2.2 orf35的分析 | 第84-87页 |
| 第四章 总结与展望 | 第87-89页 |
| 第一节 总结 | 第87页 |
| 第二节 展望 | 第87-89页 |
| 附录1 | 第89-99页 |
| 附录2 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-107页 |
| 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第107-109页 |
| 致谢 | 第109-111页 |
| 个人简历 | 第111-112页 |
