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大麦和性花叶病毒(BaMMV)和燕麦花叶病毒(OMV)的分子生物学研究

表格目录第8-9页
List of Tables第9-10页
图目录第10-12页
List of Figures第12-14页
中文摘要第14-16页
英文摘要第16页
第一章 文献综述:大麦黄花叶病毒属的研究进展第17-52页
    1.1 生物学第17-23页
        1.1.1 种类及分布第17-18页
        1.1.2 症状第18-19页
        1.1.3 寄主范围第19-20页
        1.1.4 经济损失第20-21页
        1.1.5 血清学第21页
        1.1.6 病理学特征第21-22页
        1.1.7 病毒流行学第22页
        1.1.8 病毒粒子第22-23页
    1.2 传播介体:禾谷多粘菌第23-26页
        1.2.1 生活史第23-24页
        1.2.2 分类地位、寄主范围和传播的病毒第24-25页
        1.2.3 病毒-介体关系第25-26页
    1.3 Bymovirus属病毒基因组结构和功能第26-47页
        1.3.1 基因组结构及特征第27-38页
            1.3.1.1 大麦黄花叶病毒(Barley yellow mosaic virus,BaYMV)第27-29页
                1.3.1.1.1 BaYMV基因组结构及特征第27-28页
                1.3.1.1.2 中国BaYMV分离物的研究第28-29页
            1.3.1.2 大麦和性花叶病毒(Barley mild mosaic virus,BaMMV)第29-32页
                1.3.1.2.1 BaMMV基因组结构及特征第29-31页
                1.3.1.2.2 中国BaMMV的研究第31-32页
            1.3.1.3 小麦黄花叶病毒(Wheat yellow mosaic virus,WYMV)和小麦梭条花叶病毒(Wheat spindle streak mosaic virus,WSSMV)第32-38页
                1.3.1.3.1 基因组结构及特征第32-35页
                1.3.1.3.2 中国WYMV的研究第35-36页
                1.3.1.3.3 分子进化和株系分化第36-38页
        1.3.2 病毒基因组编码蛋白的功能第38-47页
            1.3.2.1 P1蛋白第38-40页
            1.3.2.2 P2蛋白第40-41页
            1.3.2.3 P3蛋白第41页
            1.3.2.4 6K1短肽第41-42页
            1.3.2.5 CI蛋白第42-43页
            1.3.2.6 6K2短肽第43页
            1.3.2.7 NIa蛋白第43-45页
            1.3.2.8 NIb蛋白第45-46页
            1.3.2.9 外壳蛋白第46-47页
    1.4 禾谷多粘菌传病毒的复合侵染以及大小麦对Bymovirus的抗性机理及抗病育种工作第47-52页
        1.4.1 禾谷多粘菌传病毒的复合侵染第47页
        1.4.2 大小麦对Bymovirus的抗性机理第47-49页
        1.4.3 Bymovirus的防治第49-52页
            1.4.3.1 生物防治第49页
            1.4.3.2 田间管理第49-50页
            1.4.3.3 化学防治第50页
            1.4.3.4 抗病育种第50-52页
第二章 材料与方法第52-74页
    2.1 病叶第52页
    2.2 试剂第52-53页
    2.3 仪器第53页
    2.4 菌株和质粒第53页
    2.5 细菌和酵母的培养基第53-54页
        2.5.1 细菌的培养基第53-54页
        2.5.2 酵母的培养基第54页
    2.6 Bymovirus的提纯第54-56页
        2.6.1 试剂第54-55页
        2.6.2 步骤第55-56页
    2.7 电子显微镜技术第56页
    2.8 ELISA方法第56-57页
        2.8.1 试剂第56-57页
        2.8.2 步骤第57页
    2.9 病叶总RNA和病毒RNA抽提第57-58页
        2.9.1 病毒RNA提取(酚/氯仿法)第57-58页
        2.9.2 试剂盒纯化第58页
    2.10 RT-PCR第58-59页
        2.10.1 引物设计第58页
        2.10.2 cDNA第一链合成第58-59页
        2.10.3 PCR第59页
    2.11 5’-和3’-RACE第59-62页
        2.11.1 3’-RACE第59-61页
        2.11.2 5’-RACE第61-62页
    2.12 DNA克隆第62-68页
        2.12.1 限制性内切酶消化第62-63页
        2.12.2 DNA片段的切胶纯化第63页
            2.12.2.1 透析袋法第63页
            2.12.2.2 低熔点琼脂糖法第63页
            2.12.2.3 切胶纯化试剂盒法第63页
        2.12.3 连接反应第63-64页
        2.12.4 质粒转化宿主细菌第64-65页
            2.12.4.1 感受态细胞制备第64-65页
            2.12.4.2 转化第65页
        2.12.5 质粒转化酵母第65-66页
            2.12.5.1 感受态酵母的制备第65-66页
            2.12.5.2 转化第66页
        2.12.6 细菌转化子的筛选第66-67页
            2.12.6.1 试剂第66-67页
            2.12.6.2 步骤第67页
        2.12.7 质粒的抽提第67-68页
            2.12.7.1 试剂第67页
            2.12.7.2 步骤第67-68页
        2.12.8 试剂盒纯化质粒第68页
    2.13 DNA序列测定及分析第68-69页
    2.14 SDS-PAGE第69-71页
        2.14.1 样品的制备第69-70页
            2.14.1.1 普通蛋白样品的制备第69页
            2.14.1.2 酵母蛋白的抽提第69-70页
                2.14.1.2.1 试剂第69-70页
                2.14.1.2.2 步骤第70页
        2.14.2 配胶第70-71页
        2.14.3 上样与电泳第71页
        2.14.4 染色与脱色第71页
    2.15 Western Blot第71-72页
        2.15.1 试剂第71-72页
        2.15.2 转移第72页
        2.15.3 免疫显色反应第72页
    2.16 OMV病土毒力测试第72-74页
        2.16.1 病土来源第72-73页
        2.16.2 步骤第73-74页
第三章 中国大麦和性花叶病毒存在的进一步证据及其外壳蛋白核苷酸序列第74-82页
    3.1 引言第75页
    3.2 材料与方法第75-76页
        3.2.1 材料第75页
        3.2.2 方法第75-76页
            3.2.2.1 病毒的提纯第75页
            3.2.2.2 病毒RNA的抽提第75页
            3.2.2.3 酶联免疫吸附反应第75-76页
            3.2.2.4 免疫吸附电镜第76页
            3.2.2.5 SDS-PAGE和Western-blot第76页
            3.2.2.6 病毒外壳蛋白基因cDNA合成和PCR扩增方法第76页
            3.2.2.7 中国BaMMV外壳蛋白基因的克隆和测序第76页
    3.3 结果与讨论第76-82页
        3.3.1 大麦和性花叶病毒的分布第76-77页
        3.3.2 中国BaMMV的特性第77-78页
        3.3.3 BaMMV外壳蛋白的测序与其它分离物的比较第78-82页
第四章 燕麦花叶病毒全序列及RNA2缺失和重复突变第82-101页
    4.1 引言第82-83页
    4.2 材料第83页
    4.3 方法第83-85页
        4.3.1 OMV病土毒力的测定第83页
        4.3.2 病毒的提纯第83页
        4.3.3 病毒RNA的抽提第83页
        4.3.4 cDNA合成第83页
        4.3.5 RNA1全序列的测定第83-84页
        4.3.6 RNA2全序列的测定第84页
        4.3.7 RT-PCR产物的纯化与克隆第84-85页
        4.3.8 序列分析第85页
    4.4 结果与讨论第85-101页
        4.4.1 病土毒力的检测第85页
        4.4.2 病毒粒子特性第85-86页
        4.4.3 OMV RNA1核苷酸全序列及其编码的蛋白第86-94页
        4.4.4 OMV RNA1与其它Bymovirus成员以及其它进化相关属成员的比较第94-96页
        4.4.5 OMV RNA2核苷酸全序列及其编码的蛋白第96-100页
        4.4.6 OMV不同分离物之间的比较第100-101页
第五章 燕麦花叶病毒NIa-VPg蛋白在酵母中的真核表达第101-106页
    5.1 引言第101页
    5.2 材料与方法第101-103页
        5.2.1 OMV RNA的抽提和cDNA的合成第101页
        5.2.2 OMV VPg目的基因的扩增和克隆第101-102页
        5.2.3 酵母表达载体的构建第102-103页
        5.2.4 VPg基因在酵母中的表达第103页
        5.2.5 Western-blot检测蛋白的表达第103页
    5.3 结果与讨论第103-106页
        5.3.1 OMV VPg基因的PCR扩增和克隆第103-104页
        5.3.2 VPg酵母表达质粒的检测第104页
        5.3.3 VPg基因在酵母中的表达第104-105页
        5.3.4 讨论第105-106页
第六章 主要结论和进一步工作的建议第106-108页
    6.1 主要结论第106页
    6.2 进一步研究的建议第106-108页
第七章 参考文献第108-132页
博士研究生期间发表的论文第132-133页
博士研究生期间形成的成果第133-134页
致谢第134页

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