| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 英文缩写注释表 | 第9-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 长链非编码 RNA 概述 | 第15-18页 |
| 1.2 LncRNA 的生物学功能 | 第18-21页 |
| 1.2.1 表观遗传学调控 | 第18-19页 |
| 1.2.2 转录调控 | 第19-20页 |
| 1.2.3 转录后调控 | 第20-21页 |
| 1.3 LncRNA 与疾病 | 第21-23页 |
| 1.3.1 LncRNA 与肿瘤 | 第21-22页 |
| 1.3.2 LncRNA 与神经退行性疾病 | 第22-23页 |
| 1.4 LncRNA 研究策略 | 第23-25页 |
| 1.4.1 高通量分析 lncRNA 表达 | 第23-24页 |
| 1.4.2 海量数据分析和鉴定 | 第24页 |
| 1.4.3 LncRNA 和蛋白相互作用研究方法 | 第24-25页 |
| 1.5 MEG3 的发现、特征及功能 | 第25-27页 |
| 第二章 LncRNAMEG3 在肝癌细胞中的功能及作用机制研究 | 第27-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-32页 |
| 2.1.1 组织标本 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株、细胞系及质粒 | 第27-28页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第28页 |
| 2.1.4 主要试剂与材料 | 第28-29页 |
| 2.1.5 主要溶液的配制 | 第29-32页 |
| 2.1.6 引物和 siRNA 序列 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-46页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第32-33页 |
| 2.2.2 总 RNA 的提取和实时定量 PCR | 第33-35页 |
| 2.2.3 构建 MEG3 表达载体 | 第35-37页 |
| 2.2.4 细胞转染 | 第37-38页 |
| 2.2.5 MEG3 稳定株的筛选 | 第38-39页 |
| 2.2.6 CCK8 检测细胞增殖和克隆形成实验 | 第39页 |
| 2.2.7 细胞周期和凋亡检测 | 第39-40页 |
| 2.2.8 Western blot | 第40-42页 |
| 2.2.9 双荧光素酶报告基因实验 | 第42页 |
| 2.2.10 RNA pulldown 和 RNA 免疫共沉淀 | 第42-46页 |
| 2.2.11 p53 蛋白半衰期检测 | 第46页 |
| 2.3 实验结果 | 第46-62页 |
| 2.3.1 基因表达谱测序筛选肝癌组织中差异表达 ncRNA | 第46-47页 |
| 2.3.2 部分 lncRNA 在肝癌组织中表达失调 | 第47-48页 |
| 2.3.3 MEG3、GAS5、SNHG6 和 NCRNA00107 表达载体构建 | 第48-49页 |
| 2.3.4 MEG3 抑制肝癌细胞增殖 | 第49-50页 |
| 2.3.5 MEG3 促进肝癌细胞凋亡 | 第50-52页 |
| 2.3.6 MEG3 增强 p53 转录活性 | 第52-54页 |
| 2.3.7 MEG3 与 p53 相互作用 | 第54-56页 |
| 2.3.8 MEG3 调控 p53 下游靶基因 | 第56-62页 |
| 2.4 讨论和总结 | 第62-67页 |
| 2.4.1 讨论 | 第62-65页 |
| 2.4.2 总结 | 第65-67页 |
| 第三章 基于芯片分析肝癌中的 lncRNA 表达模式 | 第67-83页 |
| 3.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 3.1.1 病人肿瘤样本 | 第67-68页 |
| 3.1.2 主要试剂与材料 | 第68页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第68页 |
| 3.1.4 引物 | 第68页 |
| 3.2 实验方法 | 第68-69页 |
| 3.2.1 组织总 RNA 提取和实时定量 PCR | 第68页 |
| 3.2.2 芯片分析和生物信息学分析 | 第68-69页 |
| 3.3 实验结果 | 第69-79页 |
| 3.3.1 肝癌和癌旁组织 RNA 鉴定 | 第69-70页 |
| 3.3.2 肝癌组织中 lncRNA 和 mRNA 的表达谱 | 第70-71页 |
| 3.3.3 LncRNA 分类和亚类分析 | 第71页 |
| 3.3.4 差异表达 mRNA 的功能富集 | 第71-72页 |
| 3.3.5 差异表达 lncRNA 的基因组位置 | 第72-73页 |
| 3.3.6 LncRNA-mRNA 共表达网络 | 第73-76页 |
| 3.3.7 部分 lncRNA 在肝癌组织中的表达失调 | 第76-79页 |
| 3.4 讨论和总结 | 第79-83页 |
| 3.4.1 讨论 | 第79-81页 |
| 3.4.2 总结 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-95页 |
| 附录 | 第95-101页 |
| 个人简历 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
