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调控辣椒素生物合成的主要转录因子筛选及功能验证

摘要第3-5页
ABSTRACT第5-7页
1 前言第13-20页
    1.1 研究背景第13-19页
        1.1.1 辣椒(Capsicum L.)第13页
        1.1.2 辣椒素简介第13页
        1.1.3 辣椒素相关研究进展第13-19页
            1.1.3.1 辣椒素类物质的生物合成第13-15页
            1.1.3.2 辣味基因的标记与QTL定位第15页
            1.1.3.3 辣椒素类物质生物合成过程中相关基因的研究第15-18页
            1.1.3.4 辣椒素生物合成途径中的调控第18-19页
    1.2 研究目的意义与技术路线第19-20页
        1.2.1 研究目的及意义第19-20页
        1.2.2 技术路线第20页
            1.2.2.1 转录因子的筛选和表达分析第20页
            1.2.2.2 转录因子的功能验证第20页
            1.2.2.3 转录因子和辣椒素合成相关结构基因启动子结合位点验证第20页
            1.2.2.4 将关键结构基因CaAT3导入到番茄进行功能验证。第20页
2 材料与方法第20-27页
    2.1 实验材料第20-21页
        2.1.1 植物材料第20页
        2.1.2 载体第20页
        2.1.3 菌株第20-21页
    2.2 实验方法第21-27页
        2.2.1 转录组生物信息学分析第21页
        2.2.2 辣椒DNA的提取第21-22页
        2.2.3 RNA分离与c DNA第一链的合成第22-23页
        2.2.4 CaCl2法制备大肠杆菌DH5α 感受态细胞第23页
        2.2.5 连接产物转化大肠杆菌感受态第23页
        2.2.6 农杆菌感受态的制备第23-24页
        2.2.7 重组质粒转化农杆菌感受态细胞第24页
        2.2.8 q RT-PCR分析第24页
        2.2.9 病毒诱导基因沉默第24-25页
        2.2.10 启动子克隆及元件分析第25页
        2.2.11 酵母单杂交第25-26页
        2.2.12 辣椒素含量测定第26-27页
            2.2.12.1 标准溶液的制备第26页
            2.2.12.2 样品溶液的制备第26-27页
            2.2.12.3 色谱条件第27页
        2.2.13 转录因子的软件分析第27页
        2.2.14 启动子序列分析第27页
        2.2.15 番茄的遗传转化第27页
3 结果与分析第27-48页
    3.1 转录数据生物信息学分析第27-29页
        3.1.1 胎座中差异表达基因分析第27页
        3.1.2 辣椒中ERF和WRKY转录因子家族的生物信息学分析第27-29页
    3.2 ‘740’自交系辣椒的ERF和WRKY转录因子家族的表达分析第29-30页
    3.3 q RT-PCR分析辣椒VIGS处理后ERF和WRKY转录表达模式第30-32页
    3.4 VIGS处理后辣椒素含量的测定第32-34页
    3.5 转录因子的亚细胞定位预测分析第34-35页
    3.6 辣椒ERF和WRKY鉴定和分类第35-36页
        3.6.1 转录因子的保守区域分析第35-36页
    3.7 不同品种辣椒的启动子序列比对第36-41页
    3.8 启动子序列元件分析第41-46页
    3.9 酵母单杂交验证CaERF1、CaERF3、CaWRKY1、CaWRKY2和CaAT3启动子结合第46-47页
    3.10 转基因植株的获得第47-48页
4 讨论第48-51页
    4.1 启动子序列比对及元件分析第48页
    4.2 转录因子对辣椒素合成的调控研究第48-50页
        4.2.1 ERF转录因子对辣椒素合成的影响第48-49页
        4.2.2 WRKY转录因子在辣椒素合成途径的研究第49-50页
    4.3 转录因子生物信息学分析的应用第50页
    4.4 CaAT3的转化第50-51页
5 结论第51-52页
致谢第52-53页
参考文献第53-59页

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