| 摘要 | 第4-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 中英文缩略词对照表 | 第17-20页 |
| 前言 | 第20-24页 |
| 第1章 综述 | 第24-48页 |
| 1.1 宫颈癌 | 第24-25页 |
| 1.1.1 流行病学 | 第24页 |
| 1.1.2 病因学与发病机制的研究进展 | 第24-25页 |
| 1.2 microRNA | 第25-45页 |
| 1.2.1 结构和功能 | 第25-27页 |
| 1.2.2 microRNA参与宫颈癌的发生 | 第27-30页 |
| 1.2.3 microRNA参与宫颈癌的发展 | 第30-33页 |
| 1.2.4 microRNA与宫颈癌的预后 | 第33-37页 |
| 1.2.5 microRNA与宫颈癌的治疗 | 第37-40页 |
| 1.2.6 血液中microRNA对于宫颈癌的诊断价值 | 第40-41页 |
| 1.2.7 血液中microRNA对于宫颈癌淋巴转移的诊断价值 | 第41-42页 |
| 1.2.8 检测microRNA甲基化水平的变化对于宫颈癌诊断价值 | 第42-45页 |
| 1.3 hTERT和宫颈癌 | 第45-46页 |
| 1.4 总结 | 第46-48页 |
| 第2章 材料和方法 | 第48-73页 |
| 2.1 伦理审核 | 第48页 |
| 2.2 患者资料和标本收集 | 第48-49页 |
| 2.3 细胞系培养及转染 | 第49-51页 |
| 2.3.1 细胞复苏 | 第49页 |
| 2.3.2 细胞系的培养与传代 | 第49页 |
| 2.3.3 细胞冻存 | 第49-50页 |
| 2.3.4 细胞转染 | 第50页 |
| 2.3.5 化学合成microRNA以及转染 | 第50-51页 |
| 2.4 定量逆转录聚合酶链反应 | 第51-55页 |
| 2.4.1 试剂和器具的处理 | 第51页 |
| 2.4.2 总RNA提取 | 第51-52页 |
| 2.4.3 总RNA的电泳分析 | 第52-53页 |
| 2.4.4 逆转录反应 | 第53-54页 |
| 2.4.5 Real-time PCR | 第54-55页 |
| 2.4.6 实验结果分析 | 第55页 |
| 2.5 细胞活性和克隆能力的测定 | 第55-57页 |
| 2.5.1 MTT法检测细胞存活率 | 第55-56页 |
| 2.5.2 细胞活性以及克隆能力的测定 | 第56-57页 |
| 2.6 细胞凋亡检测 | 第57-58页 |
| 2.7 细胞迁移和/或侵袭实验 | 第58-59页 |
| 2.8 质粒构建 | 第59-65页 |
| 2.8.1 质粒构建 | 第59页 |
| 2.8.2 主要溶液和试剂的配制 | 第59-60页 |
| 2.8.3 目的片段PCR扩增 | 第60-61页 |
| 2.8.4 质粒载体和PCR产物的双酶切及凝胶回收 | 第61页 |
| 2.8.5 粘性末端的连接 | 第61-62页 |
| 2.8.6 质粒DNA的转化 | 第62页 |
| 2.8.7 质粒DNA的小量提取 | 第62-63页 |
| 2.8.8 酶切鉴定 | 第63页 |
| 2.8.9 质粒大量提取 | 第63页 |
| 2.8.10 紫外分光光度计定量 | 第63-64页 |
| 2.8.11 点突变质粒载体的构建 | 第64-65页 |
| 2.9 荧光报告系统检测 | 第65-66页 |
| 2.10 Westernblot实验 | 第66-70页 |
| 2.10.1 主要试剂和溶液的配制 | 第66-68页 |
| 2.10.2 细胞总蛋白的提取 | 第68页 |
| 2.10.3 组织总蛋白提取 | 第68-69页 |
| 2.10.4 实验步骤 | 第69-70页 |
| 2.11 小鼠移植瘤模型构建 | 第70-71页 |
| 2.11.1 实验动物购置 | 第70页 |
| 2.11.2 小鼠移植瘤模型构建步骤 | 第70-71页 |
| 2.12 材料和仪器 | 第71-72页 |
| 2.12.1 主要实验试剂 | 第71页 |
| 2.12.2 主要仪器和材料 | 第71-72页 |
| 2.13 数据处理和统计学检验 | 第72-73页 |
| 第3章 结果 | 第73-86页 |
| 3.1 miR-138 在人源宫颈癌细胞系和宫颈癌组织中表达显著下调 | 第73-76页 |
| 3.2 miR-138 可抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、克隆和抗凋亡能力 | 第76-79页 |
| 3.3 在宫颈癌细胞系HeLa中过表达miR-138 可明显抑制细胞的迁移与侵袭 | 第79-81页 |
| 3.4 miR-138 可通过调控hTERT表达来抑制宫颈癌发生发展 | 第81-84页 |
| 3.5 miR-138 可在体抑制裸鼠人宫颈癌移植瘤的发展 | 第84-86页 |
| 第4章 讨论 | 第86-94页 |
| 4.1 microRNA研究进展 | 第86-88页 |
| 4.2 microRNA与HPV感染 | 第88-89页 |
| 4.3 miR-138 与宫颈癌 | 第89-91页 |
| 4.4 miR-138 抑制宫颈癌发生、发展的机制与hTERT有关 | 第91-92页 |
| 4.5 宫颈癌中miR-138 下调的可能机制 | 第92-93页 |
| 4.6 后继的研究方向 | 第93-94页 |
| 第5章 结论 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-125页 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126页 |
