| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-30页 |
| 1.1 PRDM家族 | 第12-14页 |
| 1.1.1 PRDM家族的结构 | 第12页 |
| 1.1.2 PRDM家族的功能 | 第12-14页 |
| 1.2 PRDM14基因 | 第14-16页 |
| 1.2.1 PRDM14基因结构 | 第14页 |
| 1.2.2 PRDM14基因的表达与功能 | 第14-16页 |
| 1.3 肺癌 | 第16-23页 |
| 1.3.1 肺癌的分类 | 第18-19页 |
| 1.3.2 肺癌的治疗 | 第19-21页 |
| 1.3.3 PRDM14与肺癌的关系 | 第21-23页 |
| 1.4 MAPKs (Mitogen-activated protein kinases)信号通路 | 第23-29页 |
| 1.4.1 ERK通路 | 第23-24页 |
| 1.4.2 JNK通路 | 第24-26页 |
| 1.4.3 p38 MAPK通路 | 第26-27页 |
| 1.4.4 JNK和p38 MAPK通路的相互影响 | 第27-29页 |
| 1.5 研究的目的与意义 | 第29-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-58页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-35页 |
| 2.1.1 质粒载体 | 第30页 |
| 2.1.2 菌株和细胞 | 第30页 |
| 2.1.3 裸鼠品系及饲养 | 第30页 |
| 2.1.4 试剂及试剂盒 | 第30-31页 |
| 2.1.5 抗体 | 第31页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.1.7 主要试剂的配制方法 | 第32-35页 |
| 2.1.8 实验数据分析相关软件 | 第35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-58页 |
| 2.2.1 人PRDM14克隆 | 第35-37页 |
| 2.2.2 PRDM14过表达载体的构建 | 第37-42页 |
| 2.2.3 CRISPR-Cas9载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.4 细胞培养 | 第43-44页 |
| 2.2.5 慢病毒包装与细胞感染慢病毒 | 第44-45页 |
| 2.2.6 基因组提取 | 第45页 |
| 2.2.7 基因组整合鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2.8 T7ENI酶切实验 | 第46-47页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR | 第47-51页 |
| 2.2.10 Western Blot | 第51-53页 |
| 2.2.11 CCK8测定细胞活力 | 第53-54页 |
| 2.2.12 平板克隆形成实验和Giemsa染色 | 第54页 |
| 2.2.13 流式细胞术 | 第54-55页 |
| 2.2.14 细胞划痕实验 | 第55页 |
| 2.2.15 细胞小室实验 | 第55-56页 |
| 2.2.16 细胞侵袭实验 | 第56页 |
| 2.2.17 裸鼠接种肿瘤细胞 | 第56页 |
| 2.2.18 免疫组织化学 | 第56-57页 |
| 2.2.19 引物合成与测序 | 第57页 |
| 2.2.20 实验数据的分析与图片处理 | 第57-58页 |
| 第三章 结果与分析 | 第58-83页 |
| 3.1 过表达PRDM14慢病毒载体的构建 | 第58-59页 |
| 3.2 靶向PRDM14的CRISPR-Cas9慢病毒载体的构建 | 第59-61页 |
| 3.2.1 gRNA的设计和CRISPR-Cas9载体的构建 | 第59-60页 |
| 3.2.2 筛选最优gRNA | 第60-61页 |
| 3.2.3 靶向PRDM14的CRISPR-Cas9慢病毒载体的构建 | 第61页 |
| 3.3 过表达PRDM14 A549细胞系和敲低PRDM14 A549细胞系的构建 | 第61-64页 |
| 3.3.1 嘌呤霉素最适工作浓度的筛选 | 第61-62页 |
| 3.3.2 过表达PRDM14 A549细胞系鉴定 | 第62-63页 |
| 3.3.3 敲低PRDM14 A549细胞系鉴定 | 第63-64页 |
| 3.4 PRDM14促进A549细胞的增殖 | 第64-70页 |
| 3.4.1 过表达PRDM14对A549细胞增殖的影响 | 第64-65页 |
| 3.4.2 过表达PRDM14对原癌基因表达水平的影响 | 第65-66页 |
| 3.4.3 敲低PRDM14对A549细胞增殖的影响 | 第66-67页 |
| 3.4.4 PRDM14在体内对A549细胞增殖的影响 | 第67-70页 |
| 3.5 PRDM14对A549细胞周期的影响 | 第70-73页 |
| 3.5.1 流式细胞术检测A549细胞周期 | 第70-71页 |
| 3.5.2 细胞周期相关因子表达水平的检测 | 第71-73页 |
| 3.6 PRDM14促进A549细胞的迁移和侵袭能力 | 第73-76页 |
| 3.6.1 伤口愈合实验分析PRDM14对A549细胞迁移能力的影响 | 第73-75页 |
| 3.6.2 细胞小室实验分析PRDM14对A549细胞迁移能力的影响 | 第75-76页 |
| 3.6.3 细胞小室实验分析PRDM14对A549细胞侵袭能力的影响 | 第76页 |
| 3.7 PRDM14降低A549细胞对化疗药物的敏感性 | 第76-80页 |
| 3.7.1 CCK8实验检测A549细胞感染化疗药物后的细胞活力 | 第77-78页 |
| 3.7.2 流式细胞术检测A549细胞感染紫杉醇后的细胞凋亡比例 | 第78-80页 |
| 3.8 PRDM14通过p38 MAPK通路调控A549细胞增殖与凋亡 | 第80-83页 |
| 第四章 讨论 | 第83-88页 |
| 4.1 细胞系和慢病毒载体的选择与构建 | 第83页 |
| 4.2 PRDM14对非小细胞肺癌细胞增殖的促进作用 | 第83-84页 |
| 4.3 PRDM14对A549细胞迁移能力的影响 | 第84-85页 |
| 4.4 PRDM14与非小细胞肺癌恶性程度的关系 | 第85页 |
| 4.5 PRDM14的表观调控功能 | 第85页 |
| 4.6 PRDM14参与调控A549细胞增殖与凋亡的机制研究 | 第85-88页 |
| 第五章 结论与展望 | 第88-89页 |
| 5.1 结论 | 第88页 |
| 5.2 展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 附录 | 第100-109页 |
| 个人简历 | 第109页 |
