| 中文摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 1 实验材料 | 第14-17页 |
| 1.1 细胞株 | 第14页 |
| 1.2 乳腺癌组织 | 第14页 |
| 1.3 主要试剂 | 第14-16页 |
| 1.4 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2 实验方法 | 第17-28页 |
| 2.1 样品溶液配制 | 第17-18页 |
| 2.1.1 P-gp贮备液、标准曲线和质控样品的配制 | 第17页 |
| 2.1.2 TfR贮备液、标准曲线和质控样品的配制 | 第17-18页 |
| 2.2 细胞培养和组织收集 | 第18-19页 |
| 2.2.1 细胞培养 | 第18页 |
| 2.2.2 组织收集 | 第18-19页 |
| 2.3 膜蛋白提取 | 第19-20页 |
| 2.3.1 细胞膜蛋白提取 | 第19页 |
| 2.3.2 组织膜蛋白提取 | 第19-20页 |
| 2.4 基质溶液的制备 | 第20页 |
| 2.5 溶液内胰蛋白酶水解反应及SPE富集纯化 | 第20-21页 |
| 2.6 SDS-PAGE和胶内胰蛋白酶水解反应及SPE富集纯化 | 第21页 |
| 2.7 质谱条件 | 第21-22页 |
| 2.7.1 液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS) | 第21页 |
| 2.7.2 飞行时间质谱(MALDI-TOF) | 第21-22页 |
| 2.8 稳定同位素标记的肽段内标物 | 第22页 |
| 2.8.1 稳定同位素标记的P-gp肽段内标物 | 第22页 |
| 2.8.2 稳定同位素标记的TfR肽段内标物 | 第22页 |
| 2.9 方法学验证 | 第22-23页 |
| 2.10 常规的免疫学方法 | 第23-28页 |
| 2.10.1 蛋白免疫印迹(western blotting) | 第23-24页 |
| 2.10.2 免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC) | 第24-27页 |
| 2.10.3 激光共聚焦(confocal microscopy) | 第27页 |
| 2.10.4 流式细胞术(flow cytometry) | 第27-28页 |
| 3 结果与讨论 | 第28-55页 |
| 3.1 利用基于LC-MS/MS的定向蛋白质组学对P-gp的研究 | 第28-43页 |
| 3.1.1 细胞和组织的P-gp的提取 | 第28-29页 |
| 3.1.2 P-gp胰蛋白酶水解特异性肽段在LC-MS/MS上的响应 | 第29-31页 |
| 3.1.3 胰蛋白酶水解效率的考察 | 第31-32页 |
| 3.1.4 P-gp的LC-MS/MS方法的建立及验证 | 第32-36页 |
| 3.1.5 乳腺癌细胞中P-gp含量测定 | 第36-39页 |
| 3.1.6 乳腺癌组织中P-gp含量测定 | 第39-43页 |
| 3.2 利用基于LC-MS/MS的定向蛋白质组学对TfR的研究 | 第43-55页 |
| 3.2.1 细胞和组织的TfR的提取 | 第43-44页 |
| 3.2.2 TfR胰蛋白酶水解特异性肽段在LC-MS/MS上的响应 | 第44-46页 |
| 3.2.3 胰蛋白酶水解效率的考察 | 第46-47页 |
| 3.2.4 TfR的LC-MS/MS方法的建立及验证 | 第47-50页 |
| 3.2.5 乳腺癌细胞中TfR含量测定 | 第50-51页 |
| 3.2.6 乳腺癌组织中TfR含量测定 | 第51-55页 |
| 4 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 综述 | 第63-71页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 硕士研究生期间发表文章情况 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
