| 摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 植物microRNA的形成及调控机制 | 第12-13页 |
| 1.2 种子发育中microRNA的作用 | 第13-15页 |
| 1.2.1 种胚发育中microRNA的调控作用 | 第13-14页 |
| 1.2.2 胚乳发育中microRNA的调控作用 | 第14-15页 |
| 1.2.3 种皮发育中microRNA的调控作用 | 第15页 |
| 1.2.4 储藏物质积累中microRNA的调控作用 | 第15页 |
| 1.3 种子休眠与萌发中microRNA的调控作用 | 第15-17页 |
| 1.3.1 microRNA参与植物激素信号传导调控 | 第15-16页 |
| 1.3.2 microRNA参与其它关键转录因子调控 | 第16-17页 |
| 1.3.3 microRNA介导的胁迫响应及各种环境因子诱导的表达调控 | 第17页 |
| 1.4 植物RNA的提取 | 第17-18页 |
| 1.5 内参基因筛选 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究目的意义 | 第19-21页 |
| 第二章 天女木兰种子总RNA提取方法的建立与优化 | 第21-30页 |
| 2.1 试验材料与样品制备 | 第21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 RNase的去除 | 第21页 |
| 2.2 RNA提取方法 | 第21-23页 |
| 2.3 总RNA质量检测 | 第23页 |
| 2.4 PCR检测 | 第23-24页 |
| 2.4.1 逆转录(RT-PCR)体系 | 第23页 |
| 2.4.2 PCR扩增体系 | 第23-24页 |
| 2.5 结果与分析 | 第24-28页 |
| 2.5.1 不同方法提取的总RNA质量分析 | 第24-25页 |
| 2.5.2 改良TRIzol法的优化 | 第25页 |
| 2.5.3 PCR质量检测 | 第25-26页 |
| 2.5.4 天女木兰其它组织总RNA提取效果比较 | 第26-28页 |
| 2.6 讨论 | 第28-29页 |
| 2.7 小结 | 第29-30页 |
| 第三章 基于转录组数据的天女木兰内参基因筛选 | 第30-37页 |
| 3.1 试验材料及样品制备 | 第30页 |
| 3.2 试验方法 | 第30-31页 |
| 3.2.1 候选内参基因的筛选 | 第30页 |
| 3.2.2 RNA提取及cDNA合成 | 第30页 |
| 3.2.3 PCR引物设计 | 第30页 |
| 3.2.4 内参基因qRT-PCR | 第30-31页 |
| 3.2.5 引物扩增效率计算 | 第31页 |
| 3.2.6 内参基因表达稳定性评价 | 第31页 |
| 3.3 结果与分析 | 第31-35页 |
| 3.3.1 候选内参基因筛选 | 第31页 |
| 3.3.2 候选内参基因扩增特异性及效率分析 | 第31-32页 |
| 3.3.3 候选内参基因表达水平分析 | 第32-33页 |
| 3.3.4 候选内参基因表达稳定性分析 | 第33-34页 |
| 3.3.5 候选内参基因表达稳定性综合评价 | 第34-35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-36页 |
| 3.5 小结 | 第36-37页 |
| 第四章 天女木兰种子microRNA鉴定及萌发过程中表达模式分析 | 第37-59页 |
| 4.1 试验材料与样品制备 | 第37页 |
| 4.2 试验方法 | 第37-38页 |
| 4.2.1 总RNA提取及sRNA文库构建 | 第37页 |
| 4.2.2 sRNA分析与microRNA预测 | 第37页 |
| 4.2.3 microRNA靶基因的预测及功能注释 | 第37-38页 |
| 4.2.4 microRNA差异表达分析 | 第38页 |
| 4.2.5 qRT-PCR及qPCR分析靶基因表达 | 第38页 |
| 4.3 结果与分析 | 第38-56页 |
| 4.3.1 sRNA文库序列分析 | 第38-39页 |
| 4.3.2 microRNA的鉴定及序列特征 | 第39-41页 |
| 4.3.3 天女木兰种子保守microRNA的鉴定及特征 | 第41-42页 |
| 4.3.4 天女木兰种子新的microRNA鉴定及特征 | 第42页 |
| 4.3.5 天女木兰种子萌发过程中microRNA差异表达分析 | 第42-46页 |
| 4.3.6 microRNA靶基因预测及注释 | 第46-49页 |
| 4.3.7 microRNA及其靶基因表达分析 | 第49-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-57页 |
| 4.5 小结 | 第57-59页 |
| 第五章 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 附录 | 第69-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第80-81页 |
