| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第12-27页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 植物反应器的概述 | 第12-16页 |
| 1.2.1 植物生物反应器的发展过程 | 第12-13页 |
| 1.2.2 植物反应器的一般流程 | 第13页 |
| 1.2.3 植物反应器的优缺点 | 第13-14页 |
| 1.2.4 利用植物反应器生产疫苗抗原 | 第14-15页 |
| 1.2.5 利用植物反应器生产抗体 | 第15-16页 |
| 1.3 常用的植物转化策略 | 第16-18页 |
| 1.3.1 稳定的细胞核转化 | 第16页 |
| 1.3.2 稳定的质体转化 | 第16-17页 |
| 1.3.3 植物细胞悬浮培养系统 | 第17页 |
| 1.3.4 瞬时表达系统 | 第17-18页 |
| 1.4 生物反应器低产量的问题和优化方法 | 第18-22页 |
| 1.4.1 宿主植物的选择 | 第18-20页 |
| 1.4.2 启动子的选择 | 第20页 |
| 1.4.3 转录表达的优化 | 第20-22页 |
| 1.5 下游加工的费用的优化 | 第22-23页 |
| 1.5.1 油体蛋白表达系统 | 第22-23页 |
| 1.5.2 口服疫苗 | 第23页 |
| 1.5.3 水培系统和亲和标记物 | 第23页 |
| 1.6 生物安全性问题和解决办法 | 第23-24页 |
| 1.7 胰岛素生产概述 | 第24-27页 |
| 1.7.1 糖尿病及相关治疗药物 | 第24页 |
| 1.7.2 胰岛素的体内合成 | 第24-25页 |
| 1.7.3 胰岛素研究进展 | 第25页 |
| 1.7.4 常用的重组人胰岛素类似物 | 第25页 |
| 1.7.5 人胰岛素的表达系统 | 第25-27页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第27-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-34页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.1.3 分子试验试剂和仪器 | 第27-29页 |
| 2.1.4 主要溶液及培养基 | 第29-33页 |
| 2.1.5 引物和胰岛素原基因的改造 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-42页 |
| 2.2.1 基本的分子生物学实验 | 第34-38页 |
| 2.2.2 农杆菌和基因枪法介导的植株转化 | 第38-41页 |
| 2.2.3 转基因植株的PCR检测 | 第41页 |
| 2.2.4 GUS染色验证 | 第41-42页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第42-54页 |
| 3.1 植物表达载体的构建 | 第42-46页 |
| 3.1.1 胰岛素原目的基因的获取 | 第42页 |
| 3.1.2 pCAMBIA3301植物表达载体的构建 | 第42-44页 |
| 3.1.3. pCAMBIA2301表达载体构建 | 第44-46页 |
| 3.2 烟草和玉米的遗传转化 | 第46-48页 |
| 3.2.1 农杆菌介导的烟草的遗传转化 | 第46页 |
| 3.2.2 pCAMBIA3301-proinsulin转基因烟草筛选纯合体 | 第46-47页 |
| 3.2.3 农杆菌介导的玉米的遗传转化 | 第47-48页 |
| 3.2.4 基因枪介导的玉米转化流程 | 第48页 |
| 3.3 转基因烟草和玉米的检测 | 第48-52页 |
| 3.3.1 pCAMBIA3301-proinsulin植物表达载体转基因烟草检测 | 第48-50页 |
| 3.3.2 Cre/Loxp系统双表达载体阳性烟草获取和检测 | 第50-52页 |
| 3.4 pCAMBIA3301-proinsulin植物表达载体转基因玉米检测 | 第52-54页 |
| 3.4.1 pCAMBIA3301-proinsulin植物表达载体转基因玉米的RNA的提取 | 第52-53页 |
| 3.4.2 pCAMBIA3301-proinsulin植物表达载体转基因玉米的RT-PCR检测结果 | 第53-54页 |
| 第四章 讨论与总结 | 第54-57页 |
| 4.1 胰岛素原表达情况的讨论 | 第54页 |
| 4.2 基因枪法和农杆菌介导法转化玉米方法的比较和影响因素分析 | 第54-55页 |
| 4.3 Cre/IoxP位点特异性重组酶系统删除方法的比较 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 附件 | 第65页 |
