| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一部分 实验研究 | 第12-45页 |
| 第一章 CRISPR/Cas9以及打靶载体的构建 | 第12-33页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 1 实验材料 | 第13-15页 |
| 1.1 实验材料 | 第13页 |
| 1.2 实验设备 | 第13-14页 |
| 1.3 实验试剂耗材 | 第14-15页 |
| 1.3 实验所用的培养基及其他液体配方 | 第15页 |
| 1.4 引物合成和测序 | 第15页 |
| 2 方法 | 第15-23页 |
| 2.1 CRISPR/Cas9载体的构建 | 第15-16页 |
| 2.2 pNlrkt打靶载体的构建 | 第16-23页 |
| 3 结果 | 第23-28页 |
| 3.1 pGlrkt-1载体改造结果 | 第23页 |
| 3.2 同源臂扩增结果 | 第23-24页 |
| 3.3 载体构建结果 | 第24-28页 |
| 4 讨论 | 第28-29页 |
| 5 小结 | 第29-30页 |
| 参考文献 | 第30-33页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9介导EGFP基因在牛NANOG位点的定点整合 | 第33-44页 |
| 前言 | 第33-34页 |
| 1 试剂和设备 | 第34-35页 |
| 1.1 实验材料 | 第34页 |
| 1.2 实验试剂 | 第34页 |
| 1.3 实验设备 | 第34-35页 |
| 1.4 实验所用的培养基及其他液体配方 | 第35页 |
| 1.5 引物合成和测序 | 第35页 |
| 2 方法 | 第35-38页 |
| 2.1 电转染条件的优化 | 第35-36页 |
| 2.2 打靶细胞的制备和筛选 | 第36-37页 |
| 2.3 提取基因组DNA | 第37-38页 |
| 2.4 转基因细胞的鉴定 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-39页 |
| 3.1 电转条件优化结果 | 第38-39页 |
| 3.2 转基因细胞鉴定结果 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-42页 |
| 5 小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-44页 |
| 实验结论 | 第44-45页 |
| 第二部分 文献综述 Nanog的研究进展 | 第45-56页 |
| 前言 | 第45页 |
| 1 Nanog基因结构 | 第45-46页 |
| 1.1 系统发育分析 | 第46页 |
| 2 Nanog基因的表达特征 | 第46-47页 |
| 3 Nanog与胚胎发育 | 第47-48页 |
| 4 Nanog与胚胎干细胞 | 第48-49页 |
| 5 Nanog与信号转导通路 | 第49-50页 |
| 5.1 Nanog与LIF/GP130 | 第49页 |
| 5.2 Nanog与BMP | 第49页 |
| 5.3 Nanog与Wnt/β-catenin | 第49-50页 |
| 6 Nanog与Sox2、Oct4 | 第50-51页 |
| 7 Nanog与疾病 | 第51-52页 |
| 8 展望 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 致谢 | 第56页 |