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RXLR类效应分子PITG21645.2的基因序列分析及功能验证

符号说明第4-8页
中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
1. 引言第12-25页
    1.1 马铃薯产业发展第12-13页
        1.1.1 马铃薯的来源及特性第12页
        1.1.2 马铃薯的产业现状与主粮化第12-13页
        1.1.3 马铃薯的产业所面临的问题第13页
    1.2 马铃薯晚疫病第13-17页
        1.2.1 致病疫霉第13页
        1.2.2 马铃薯晚疫病的病原菌基本病原形态第13-14页
        1.2.3 马铃薯晚疫病菌A1与A2交配型的研究第14页
        1.2.4 马铃薯晚疫病菌的生活史第14-15页
        1.2.5 马铃薯晚疫病的病害特征第15页
        1.2.6 马铃薯晚疫病菌的传播途径第15-16页
        1.2.7 马铃薯晚疫病的发病条件第16页
            1.2.7.1 气候条件第16页
            1.2.7.2 品种及耕作水平第16页
        1.2.8 马铃薯晚疫病的防治措施第16-17页
            1.2.8.1 加强栽培管理第16页
            1.2.8.2 化学防治第16-17页
            1.2.8.3 品种改良防治第17页
            1.2.8.4 生物杀菌剂防治第17页
        1.2.9 马铃薯晚疫病菌生理小种变异第17页
    1.3 植物与微生物互作第17-20页
        1.3.1 植物与病原互作类型第17-18页
        1.3.2 R基因与Avr基因的互作第18页
        1.3.3 植物免疫系统第18-20页
            1.3.3.1 PAMPs触发的植物免疫反应第19页
            1.3.3.2 效应分子触发的免疫反应第19-20页
    1.4 马铃薯晚疫病菌抗性分子遗传学机制第20-22页
        1.4.1 垂直抗性第20-21页
        1.4.2 水平抗性第21-22页
    1.5 植物病原卵菌效应分子的研究进展第22-24页
        1.5.1 RXLR类效应分子的功能研究第22-24页
            1.5.1.1 RXLR类效应分子的激发子功能研究第23页
            1.5.1.2 PiAVR3a可以抑制INF1诱导的PCD第23页
            1.5.1.3 大豆疫霉效应分子Avh240可以抑制INF1、Avh238、Avh241诱导的PCD第23-24页
    1.6 本实验的目的意义第24-25页
2.材料与方法第25-34页
    2.1 试验材料第25页
    2.2 试验方法第25-34页
        2.2.1 卵菌菌株基因组DNA的提取第25页
        2.2.2 植物表达载体的构建第25-31页
            2.2.2.1 引物设计第25页
            2.2.2.2 PCR扩增目的片段第25-26页
            2.2.2.3 胶回收DNA目的片段(试剂盒)第26-27页
            2.2.2.4 目的片段与pGR106载体的酶切与连接第27页
            2.2.2.5 感受态细胞的制备第27-28页
            2.2.2.6 热激转化大肠杆菌DH5α第28页
            2.2.2.7 菌落PCR第28-29页
            2.2.2.8 提取重组载体的大肠杆菌的质粒第29-30页
            2.2.2.9 质粒PCR第30页
            2.2.2.10 电击转化农杆菌GV3101第30-31页
        2.2.3 在本氏烟上瞬时表达第31页
        2.2.4 对效应分子同源基因序列的分析第31页
        2.2.5 基因的定点突变第31-32页
        2.2.6 马铃薯晚疫病菌株的活化及提高孢子囊生长量第32页
        2.2.7 马铃薯无毒苗的茎段培养第32页
        2.2.8 马铃薯晚疫病菌孢子悬浮液的制备第32页
        2.2.9 马铃薯晚疫病菌接种供试植株第32-33页
        2.2.10 基因瞬时表达的植物总RNA的提取第33页
        2.2.11 反转录PCR第33页
        2.2.12 半定量检测第33-34页
3.结果与分析第34-43页
    3.1 提取13个病原卵菌的全基因组DNA并扩增目的片段第34页
    3.2 构建13个PITG_21645.2 同源序列的瞬时表达载体第34-35页
    3.3 13 个PITG_21645.2 同源序列的序列分析第35-36页
    3.4 PITG_21645.2 同源基因抑制INF1激发PCD的功能分析第36-37页
    3.5 对PITG_21645.2MP903的定点突变第37-38页
    3.6 PITG_21645.2 同源序列定点突变的功能验证第38-39页
    3.7 PITG_21645.2 抑制BAX和PsojNIP在本氏烟激起的PT-PCD第39-40页
    3.8 PITG_21645.2 抑制大豆疫霉效应分子Avh238在本氏烟激起的ET-PCD第40-41页
    3.9 PITG_21645.2 促进致病疫霉在烟草上的侵染第41-43页
4.讨论第43-46页
    4.1 对RXLR类效应分子的研究第43页
    4.2 关于RXLR效应分子对抑制植物PTI和ETI的研究第43-44页
    4.3 病原菌可以通过基因变异或突变增强致病性第44-45页
    4.4 下一步研究的问题第45-46页
5. 结论第46-47页
参考文献第47-54页
附录Ⅰ 实验所用培养基、缓冲液配方第54-56页
附录Ⅱ 常用化学试剂、所属公司第56-57页
附录III 实验室常用仪器及所属公司第57-58页
附录IV PITG_21645.2 同源基因序列第58-61页
附录V 实验设计引物序列第61-62页
致谢第62页

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