| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 昆虫抗病毒免疫研究 | 第11-14页 |
| 1.1.1 昆虫的免疫防御机制 | 第11-13页 |
| 1.1.2 柞蚕核型多角体病毒 | 第13-14页 |
| 1.2 MicroRNA | 第14-17页 |
| 1.2.1 MicroRNA的产生机制 | 第14-15页 |
| 1.2.2 MicroRNA的调控机制 | 第15-16页 |
| 1.2.3 MicroRNA的研究方法 | 第16-17页 |
| 1.3 病毒编码的microRNA研究概述 | 第17-18页 |
| 1.3.1 病毒编码microRNA | 第17-18页 |
| 1.3.2 昆虫病毒编码的microRNA | 第18页 |
| 1.4 RNA干扰技术 | 第18-20页 |
| 1.4.1 RNAi的起源与作用机制 | 第19页 |
| 1.4.2 RNAi的应用 | 第19-20页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 2 柞蚕核型多角体病毒内源性非编码VmiRNA成熟体MD5作用的靶基因及功能分析 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料和试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.1 材料和试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.2 数据分析软件 | 第22页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第22页 |
| 2.1.4 溶液的配制 | 第22页 |
| 2.2 试验方法 | 第22-28页 |
| 2.2.1 柞蚕蛹脂肪体RNA的提取及Solexa测序分析 | 第22-23页 |
| 2.2.2 MiRNA的前体预测 | 第23页 |
| 2.2.3 MiRNA靶基因及功能预测 | 第23页 |
| 2.2.4 病毒编码miRNA基因上游启动子预测及分析 | 第23-24页 |
| 2.2.5 柞蚕蛹脂肪体总RNA提取及MD5基因检测 | 第24-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-33页 |
| 2.3.1 ApNPV基因组编码VmiRNA前体序列及二级结构特征 | 第28-30页 |
| 2.3.2 VmiRNA MD5基因启动子的预测及分析 | 第30-31页 |
| 2.3.3 MiRNA MD5前体基因的鉴定 | 第31页 |
| 2.3.4 VmiRNA MD5作用的宿主靶基因及功能 | 第31-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-34页 |
| 2.5 小结 | 第34-35页 |
| 3 柞蚕核型多角体病毒内源性非编码VmiRNA成熟体MD5基因的克隆及真核表达载体构建 | 第35-50页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第35页 |
| 3.2 试验仪器 | 第35-36页 |
| 3.3 试验方法 | 第36-45页 |
| 3.3.1 VmiRNA MD5前体基因及侧翼序列的克隆 | 第36-39页 |
| 3.3.2 PcDNA3.1(+)-A1-RFP-MD5表达载体的构建 | 第39-44页 |
| 3.3.3 重组PcDNA3.1(+)-A1-RFP-MD5质粒的鉴定 | 第44页 |
| 3.3.4 重组病毒质粒转染Tn-Hi5细胞 | 第44-45页 |
| 3.4 结果与分析 | 第45-48页 |
| 3.4.1 MD5基因侧翼序列的克隆 | 第45页 |
| 3.4.2 重组PeDNA3.1(+)-A1-RFP-MD5真核表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 3.4.3 重组质粒PcDNA3.1(+)-A1-RFP-MD5的鉴定 | 第47-48页 |
| 3.5 讨论 | 第48-49页 |
| 3.6 小结 | 第49-50页 |
| 4 柞蚕核型多角体病毒内源性非编码VmiRNA成熟体MD5的功能分析 | 第50-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第50-51页 |
| 4.1.1 材料与试剂 | 第50-51页 |
| 4.1.2 实验设备 | 第51页 |
| 4.2 试验方法 | 第51-56页 |
| 4.2.1 重组质粒转染昆虫Tn-Hi5细胞及克隆筛选 | 第51-52页 |
| 4.2.2 CY3标记的MD5 mimics转染至昆虫Tn-Hi5细胞 | 第52-53页 |
| 4.2.3 dsRNA分子的合成及细胞转染 | 第53-55页 |
| 4.2.4 细胞培养及病毒感染 | 第55-56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-60页 |
| 4.3.1 转基因细胞系PcDNA3.1(+)-A1-RFP-MD5的建立 | 第56-57页 |
| 4.3.2 CY3标记的MD5 mimics的细胞转染 | 第57-58页 |
| 4.3.3 MD5 dsRNA的合成 | 第58-59页 |
| 4.3.4 ApNPV-△ph/egfp+感染Tn-Hi5细胞的基因表达检测 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-61页 |
| 4.5 小结 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 附录A | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
