| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第9-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-31页 |
| 1.1 鱼源无乳链球菌病研究概况 | 第14-21页 |
| 1.1.1 链球菌病 | 第14页 |
| 1.1.2 无乳链球菌病 | 第14-21页 |
| 1.2 细菌双组份系统 | 第21-26页 |
| 1.2.1 双组份系统概况 | 第21页 |
| 1.2.2 无乳链球菌的双组份系统 | 第21-22页 |
| 1.2.3 双组份系统PhoBR | 第22-26页 |
| 1.3 转录调控研究的方法 | 第26-29页 |
| 1.3.1 转录调控研究方法概述 | 第26-27页 |
| 1.3.2 细菌单杂交系统 | 第27-29页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 2 海水养殖卵形鲳鲹链球菌的分离鉴定 | 第31-45页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第31页 |
| 2.1.1 试验鱼 | 第31页 |
| 2.1.2 试剂及主要仪器 | 第31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-36页 |
| 2.2.1 细菌分离 | 第31-32页 |
| 2.2.2 细菌的生理生化鉴定 | 第32-34页 |
| 2.2.3 细菌的多重PCR鉴定及系统进化关系 | 第34-36页 |
| 2.3 结果与分析 | 第36-42页 |
| 2.3.1 病原菌的表型特征 | 第36-37页 |
| 2.3.2 病原菌的生化特征 | 第37-39页 |
| 2.3.3 基于 16S rRNA序列的系统进化树 | 第39-40页 |
| 2.3.4 代表菌株的毒力检测 | 第40-42页 |
| 2.3.5 抗生素敏感性 | 第42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-45页 |
| 3 无乳链球菌TOS01 phoB基因缺失株的构建及其生物学特性研究 | 第45-69页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第45-46页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和引物 | 第45-46页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-55页 |
| 3.2.1 分子操作方法 | 第46-49页 |
| 3.2.2 phoB基因敲除突变株SAΔphoB与互补株CΔphoB的构建 | 第49-51页 |
| 3.2.3 突变株SAΔphoB生物学特性研究 | 第51-54页 |
| 3.2.4 突变株SAΔphoB免疫保护实验 | 第54-55页 |
| 3.3 结果与分析 | 第55-67页 |
| 3.3.1 重组质粒pSET4s-PhoB的构建及鉴定 | 第55-56页 |
| 3.3.2 无乳链球菌phoB基因缺失突变株的筛选 | 第56-58页 |
| 3.3.3 phoB基因克隆及生物信息学分析 | 第58-60页 |
| 3.3.4 突变株SAΔphoB互补菌株的构建及鉴定 | 第60页 |
| 3.3.5 突变株SAΔphoB生物学特性研究 | 第60-65页 |
| 3.3.6 突变株SAΔphoB免疫保护力及其安全性评价 | 第65-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-69页 |
| 4 突变株SAΔphoB限磷条件下转录基因和蛋白图谱差异分析 | 第69-100页 |
| 4.1 材料和试剂 | 第69-70页 |
| 4.1.1 菌株和引物 | 第69-70页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第70页 |
| 4.2 方法 | 第70-77页 |
| 4.2.1 采样时间点确定 | 第70-72页 |
| 4.2.2 野生株TOS01和突变株SAΔphoB限磷条件下转录组测定 | 第72-74页 |
| 4.2.3 野生株TOS01和突变株SAΔphoB限磷条件下蛋白组测定 | 第74-77页 |
| 4.3 结果与分析 | 第77-93页 |
| 4.3.1 采样时间点确定 | 第77-78页 |
| 4.3.2 限磷条件下野生株TOS01和突变株SAΔphoB转录组测定 | 第78-89页 |
| 4.3.3 限磷条件下野生株TOS01和突变株SAΔphoB的蛋白图谱 | 第89-93页 |
| 4.3.4 转录组和蛋白组结果的相关性分析 | 第93页 |
| 4.4 讨论 | 第93-100页 |
| 4.4.1 培养条件和采样时间点 | 第93页 |
| 4.4.2 无乳链球菌phoB基因调控网络预测 | 第93-100页 |
| 5 无乳链球菌转录调控因子PhoB调控溶血素的功能验证 | 第100-117页 |
| 5.1 材料与试剂 | 第100-102页 |
| 5.1.1 菌株、质粒和引物 | 第100-101页 |
| 5.1.2 主要试剂和仪器 | 第101-102页 |
| 5.2 实验方法 | 第102-108页 |
| 5.2.1 荧光定量PCR检测cylE、hemolysin III、hemolysin A和ciaR基因表达 | 第102页 |
| 5.2.2 cyl、hemolysin III、hemolysin A和ciaR基因启动子区克隆 | 第102页 |
| 5.2.3 lacZ报告基因实验 | 第102-103页 |
| 5.2.4 细菌单杂交 | 第103-108页 |
| 5.3 结果与分析 | 第108-115页 |
| 5.3.1 荧光定量PCR检测cylE、hemolysin III、hemolysin A和ciaR基因表达 | 第108页 |
| 5.3.2 启动子区预测及扩增 | 第108-110页 |
| 5.3.3 重组质粒pDL276-启动子的构建及转化 | 第110页 |
| 5.3.4 lacZ报告基因验证PhoB与四个基因启动子的互作 | 第110-111页 |
| 5.3.5 细菌单杂交诱饵载体pB1H2-PhoB构建 | 第111-112页 |
| 5.3.6 重组质粒pH3U3-启动子构建及鉴定 | 第112页 |
| 5.3.7 Omega-PhoB蛋白表达 | 第112-113页 |
| 5.3.8 细菌单杂交验证PhoB与四个基因启动子的互作 | 第113-114页 |
| 5.3.9 PhoB的DNA结合位点预测 | 第114-115页 |
| 5.4 讨论 | 第115-117页 |
| 6 全文总结 | 第117-119页 |
| 6.1 分离到9株卵形鲳鲹源链球菌 | 第117页 |
| 6.2 成功构建无乳链球菌phoB基因缺失株 | 第117页 |
| 6.3. PhoB负调控无乳链球菌生物膜形成和正调控毒力基因表达 | 第117页 |
| 6.4. PhoB直接调控hemolysin A和ciaR基因表达 | 第117-118页 |
| 6.5.无乳链球菌PhoB结合保守序列为TTGGAGAA（G/T） | 第118-119页 |
| 参考文献 | 第119-141页 |
| 附录 | 第141-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 作者简介 | 第153-154页 |
| 导师简介 | 第154页 |
