| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 主要符号对照表 | 第9-11页 |
| 第1章 引言 | 第11-34页 |
| 1.1 电子传递链 | 第11-13页 |
| 1.1.1 真核生物的电子传递链 | 第11-12页 |
| 1.1.2 原核生物的电子传递链 | 第12-13页 |
| 1.2 N ADH脱氢酶及其分类 | 第13-15页 |
| 1.2.1 复合物I | 第13-14页 |
| 1.2.2 N qr | 第14页 |
| 1.2.3 N DH2 | 第14-15页 |
| 1.3 N DH2的研究现状 | 第15-18页 |
| 1.3.1 N DH2的分类 | 第15-16页 |
| 1.3.2 N DH2的生理意义 | 第16-17页 |
| 1.3.3 N DH2蛋白结构的研究 | 第17-18页 |
| 1.4 酵母的N DH2蛋白——N di1 | 第18-22页 |
| 1.4.1 N di1作为基因治疗手段 | 第18-20页 |
| 1.4.2 N di1的酶反应机制 | 第20-22页 |
| 1.5 病原微生物与N DH2 | 第22-24页 |
| 1.6 肺结核及结核分枝杆菌 | 第24-29页 |
| 1.6.1 肺结核现状 | 第24-27页 |
| 1.6.2 结核分枝杆菌 | 第27页 |
| 1.6.3 抗结核药物及其靶点 | 第27-29页 |
| 1.7 结核分枝杆菌呼吸链及其N DH2 | 第29-33页 |
| 1.7.1 结核分枝杆菌的呼吸链 | 第29-30页 |
| 1.7.2 Mtb N DH2是无氧条件下起始呼吸链的关键蛋白 | 第30-31页 |
| 1.7.3 Mtb N DH2与异烟肼和乙醇胺耐受有关 | 第31-32页 |
| 1.7.4 Mtb N DH2抑制剂有抗TB作用 | 第32-33页 |
| 1.8 潜在药物靶点—— N DH2 | 第33-34页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第34-58页 |
| 2.1 实验仪器 | 第34-36页 |
| 2.2 实验试剂 | 第36-43页 |
| 2.2.1 实验用菌株 | 第36-37页 |
| 2.2.2 基因及菌株获取途径 | 第37页 |
| 2.2.3 表达载体的选择 | 第37-38页 |
| 2.2.4 实验常用培基 | 第38-41页 |
| 2.2.5 常用储液及缓冲液 | 第41-43页 |
| 2.2.6 常用试剂盒 | 第43页 |
| 2.3 实验方法 | 第43-58页 |
| 2.3.1 分子克隆 | 第43-46页 |
| 2.3.2 蛋白表达 | 第46-47页 |
| 2.3.3 蛋白纯化 | 第47-50页 |
| 2.3.4 蛋白结晶及优化 | 第50-52页 |
| 2.3.5 蛋白与底物复合物的结晶 | 第52页 |
| 2.3.6 数据收集及相位问题 | 第52-54页 |
| 2.3.7 酶活测定 | 第54-55页 |
| 2.3.8 酵母实验 | 第55-56页 |
| 2.3.9 电子顺磁共振实验 | 第56-57页 |
| 2.3.10结核分枝杆菌生长抑制实验 | 第57-58页 |
| 第3章 酵母Ndi1蛋白的纯化及结晶 | 第58-76页 |
| 3.1 本章引论 | 第58页 |
| 3.2 蛋白的基本信息分析 | 第58-60页 |
| 3.3 蛋白的表达纯化 | 第60-65页 |
| 3.3.1 克隆构建 | 第60页 |
| 3.3.2 蛋白的表达 | 第60-61页 |
| 3.3.3 蛋白的纯化 | 第61-63页 |
| 3.3.4 突变体蛋白的纯化 | 第63-65页 |
| 3.4 N di1蛋白晶体的筛选及优化 | 第65-73页 |
| 3.4.1 晶体的初筛选尝试 | 第66-67页 |
| 3.4.2 基于TritonX- 100分子的晶体筛选 | 第67-69页 |
| 3.4.3 N di1蛋白晶体的优化 | 第69-72页 |
| 3.4.4 N di1硒代蛋白晶体 | 第72页 |
| 3.4.5 N di1蛋白与底物的复合物晶体 | 第72-73页 |
| 3.5 衍射数据的收集和处理 | 第73-75页 |
| 3.6 小结 | 第75-76页 |
| 第4章 酵母Ndi1蛋白的结构与生化研究 | 第76-99页 |
| 4.1 本章引论 | 第76页 |
| 4.2 N di1蛋白的晶体结构 | 第76-92页 |
| 4.2.1 N di1蛋白的整体结构 | 第76-78页 |
| 4.2.2 TritonX- 100在蛋白中的结合位置 | 第78页 |
| 4.2.3 高度保守的C端结构域 | 第78-79页 |
| 4.2.4 C端结构域介导N di1蛋白的二聚化 | 第79-83页 |
| 4.2.5 C端结构域介导N di1蛋白的膜锚定 | 第83-86页 |
| 4.2.6 N di1蛋白及其底物 | 第86-92页 |
| 4.3 N di1蛋白的电子传递机制 | 第92-98页 |
| 4.3.1 N di1-N ADH-Q的复合物结构 | 第93-94页 |
| 4.3.2 与Pdr- Pdx复合物的结构比对 | 第94-95页 |
| 4.3.3 N di1蛋白中可能的电子传递路径 | 第95页 |
| 4.3.4 电子顺磁共振实验检测半醌自由基 | 第95-96页 |
| 4.3.5 功率饱和实验检测存在两种半醌自由基 | 第96-98页 |
| 4.4 本章小结 | 第98-99页 |
| 第5章 结核分枝杆菌及其他病原微生物NDH2的研究 | 第99-127页 |
| 5.1 本章引论 | 第99页 |
| 5.2 结核分枝杆菌N DH2的表达纯化 | 第99-108页 |
| 5.2.1 二级结构预测及克隆构建 | 第99-100页 |
| 5.2.2 蛋白表达 | 第100-102页 |
| 5.2.3 蛋白纯化 | 第102-107页 |
| 5.2.4 晶体的筛选 | 第107-108页 |
| 5.3 体外药物筛选 | 第108-113页 |
| 5.3.1 体外检测蛋白活性 | 第108-109页 |
| 5.3.2 抑制剂筛选 | 第109-111页 |
| 5.3.3 IC50检测 | 第111页 |
| 5.3.4 结核分枝杆菌生长抑制实验 | 第111-113页 |
| 5.4 其他物种N DH2的研究 | 第113-125页 |
| 5.4.1 耻垢分枝杆菌N DH2 | 第114-116页 |
| 5.4.2 无乳链球菌N DH2 | 第116-119页 |
| 5.4.3 恶性疟原虫N DH2 | 第119-122页 |
| 5.4.4 其他物种N DH2 | 第122-125页 |
| 5.5 小结 | 第125-127页 |
| 第6章 讨论与展望 | 第127-137页 |
| 6.1 本章引论 | 第127页 |
| 6.2 酵母N di1蛋白 | 第127-131页 |
| 6.2.1 C端结构域 | 第127-129页 |
| 6.2.2 N di1蛋白的电子传递 | 第129-131页 |
| 6.3 Mtb等病原微生物N DH2蛋白的研究 | 第131-132页 |
| 6.3.1 M.sm eg与Mtb N DH2蛋白 | 第131-132页 |
| 6.3.2 其他病原微生物的N DH2蛋白 | 第132页 |
| 6.4 展望 | 第132-137页 |
| 6.4.1 N di1蛋白存在的问题 | 第133-134页 |
| 6.4.2 病原微生物N DH2蛋白的结构 | 第134-135页 |
| 6.4.3 病原微生物N DH2蛋白抑制剂的筛选与优化 | 第135-136页 |
| 6.4.4 抑制剂的体内实验 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-148页 |
| 致谢 | 第148-151页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第151页 |
