| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 杆状病毒概论 | 第11-15页 |
| 1.1.1 杆状病毒的起源及形态特征 | 第11页 |
| 1.1.2 杆状病毒的分类和进化 | 第11-13页 |
| 1.1.3 杆状病毒的感染过程及感染周期 | 第13-15页 |
| 1.2 细胞凋亡及凋亡抑制 | 第15-16页 |
| 1.2.1 细胞凋亡概述 | 第15-16页 |
| 1.2.2 杆状病毒引起的昆虫细胞凋亡 | 第16页 |
| 1.3 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 | 第16-19页 |
| 1.3.1 蛋白表达系统概述 | 第16-18页 |
| 1.3.2 杆状病毒表达载体的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.4 RNA干扰技术 | 第19-20页 |
| 1.5 rpsL-neo反筛系统 | 第20-22页 |
| 1.6 选题目的、意义及依据 | 第22-23页 |
| 第二章 敲除AcMNPV bacmid的几丁质酶与类组织蛋白酶基因 | 第23-29页 |
| 2.1 材料与试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第24页 |
| 2.1.5 引物设计与合成 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.2.1 chiA-rpsL-AMP-cath片段扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.2 敲除几丁质酶和类组织蛋白酶基因 | 第25-26页 |
| 2.2.3 筛选敲除chiA和v-cath基因的菌落 | 第26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-27页 |
| 2.3.1 rpsL-AMP片段及chiA-rpsL-AMP-cath片段扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.2 敲除chiA和v-cath基因的鉴定 | 第27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 在重组杆状病毒上表达Sf-caspase-1 全长dsRNA抑制昆虫细胞凋亡 | 第29-46页 |
| 3.1 材料与试剂 | 第29-31页 |
| 3.1.1 菌株、质粒和细胞 | 第29页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 主要溶液配制 | 第29-30页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第30页 |
| 3.1.5 引物设计与合成 | 第30-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-39页 |
| 3.2.1 TSS法制高效感受态细胞 | 第31页 |
| 3.2.2 构建重组质粒pBac5-dsCasp- forward | 第31-33页 |
| 3.2.3 构建重组质粒pBac5-dsCasp | 第33-34页 |
| 3.2.4 构建重组杆状病毒 | 第34-35页 |
| 3.2.5 用QPCR测定重组病毒滴度 | 第35页 |
| 3.2.6 PI活细胞染色法检测Sf9细胞凋亡 | 第35页 |
| 3.2.7 RT-PCR检测Sf9细胞中Sf-caspase-1 mRNA含量 | 第35页 |
| 3.2.8 构建重组质粒pET28a-chia-NcoI | 第35-37页 |
| 3.2.9 构建重组质粒pET28a-chia-dsCasp | 第37-39页 |
| 3.2.10 dsCasp片段敲入bacmid | 第39页 |
| 3.3 结果与分析 | 第39-45页 |
| 3.3.1 Sf-forward-caspase-1 片段扩增和pBac5-dsCasp-forward双酶切鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.2 Sf-reverse-caspase-1 片段扩增和重组质粒pBac5-dsCasp双酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3.3 PI活细胞染色法检测细胞凋亡 | 第41-42页 |
| 3.3.4 RT-PCR检测Sf9细胞中Sf-caspase-1 mRNA含量 | 第42-43页 |
| 3.3.5 重组质粒pET28a-chia-NcoI和pET28a-chia-dsCasp双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.6 PCR鉴定重组质粒pET28a-chia-dsCasp重组方向 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 在重组杆状病毒上表达Sf-caspase-1 shRNA抑制昆虫细胞凋亡 | 第46-62页 |
| 4.1 材料与试剂 | 第46-47页 |
| 4.1.1 菌株、质粒和细胞 | 第46页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 4.1.3 主要溶液配制 | 第46页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第46页 |
| 4.1.5 引物设计与合成 | 第46-47页 |
| 4.2 方法 | 第47-56页 |
| 4.2.1 构建重组质粒pTriExGFP-PstI | 第47-48页 |
| 4.2.2 构建重组质粒pTriExGFP-U6 | 第48-50页 |
| 4.2.3 构建重组质粒pTriEx GFP-U6-124/422/783 | 第50-52页 |
| 4.2.4 构建重组杆状病毒 | 第52页 |
| 4.2.5 用QPCR测定重组病毒滴度 | 第52页 |
| 4.2.6 PI活细胞染色法检测Sf9细胞凋亡 | 第52页 |
| 4.2.7 构建重组质粒pTriExGFP-U6-ScaI-124/422/783 | 第52-54页 |
| 4.2.8 构建重组杆状病毒 | 第54页 |
| 4.2.9 用QPCR测定重组病毒滴度 | 第54页 |
| 4.2.10 PI活细胞染色法检测Sf9细胞凋亡 | 第54页 |
| 4.2.11 构建AcMNPV bacmid-KOchiA/ 124/422/783 | 第54-55页 |
| 4.2.12 提取AcMNPV bacmid-KOchiA/ 124/422/783 | 第55-56页 |
| 4.2.13 AcMNPV -KOchiA/U6-ScaI-124/422/783 bacmid单酶切和乙醇沉淀 | 第56页 |
| 4.2.14 构建重组杆状病毒 | 第56页 |
| 4.3 结果与分析 | 第56-60页 |
| 4.3.1 重组质粒pTriExGFP-PstI和pTriExGFP-U6双酶切鉴定 | 第56-57页 |
| 4.3.2 重组质粒pTriEx GFP-U6-124/422/783 PCR鉴定及测序 | 第57页 |
| 4.3.3 PI活细胞染色法检测细胞凋亡 | 第57-58页 |
| 4.3.4 重组质粒pTriExGFP-U6-ScaI-124/422/783鉴定及测序 | 第58-59页 |
| 4.3.5 PI活细胞染色法检测细胞凋亡 | 第59页 |
| 4.3.6 筛选AcMNPV bacmid-KOchiA/ 124/422/783及测序 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 作者简介 | 第73页 |
