| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第10-24页 |
| 1.1 芽胞杆菌生成的脂肽类结构与性质 | 第10-14页 |
| 1.1.1 表面活性素(surfactin)家族 | 第10-11页 |
| 1.1.2 伊枯草菌素(iturin)家族 | 第11页 |
| 1.1.3 丰杆菌素(fengycin)家族 | 第11-14页 |
| 1.2 表面活性素的合成相关基因及合成机制 | 第14-16页 |
| 1.2.1 表面活性素的合成酶体系 | 第14-15页 |
| 1.2.2 表面活性素的合成基因 | 第15-16页 |
| 1.3 表面活性素的生理功能 | 第16-17页 |
| 1.3.1 在拮抗中的功能 | 第16页 |
| 1.3.2 在细菌运动(motility)中的作用 | 第16-17页 |
| 1.3.3 在生物膜(biofilm)形成中的作用 | 第17页 |
| 1.3.4 在种间、种内起到的信号作用 | 第17页 |
| 1.4 表面活性素家族的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.4.1 生物表面活性剂的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.4.2 表面活性素的研究现状 | 第18页 |
| 1.5 群体感应系统与Surfactin合成的调控 | 第18-22页 |
| 1.5.1 芽胞杆菌的群体感应系统 | 第19-21页 |
| 1.5.2 Surfactin的合成调控机制 | 第21-22页 |
| 1.6 本课题的研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 2 材料和方法 | 第24-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-29页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第24-25页 |
| 2.1.2 培养基、培养温度和抗生素使用浓度 | 第25-26页 |
| 2.1.3 工具酶及试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 PCR引物 | 第26-28页 |
| 2.1.5 抽提液和缓冲液 | 第28-29页 |
| 2.1.6 实验仪器 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.2.1 分子生物学方法 | 第29-32页 |
| 2.2.1.1 大肠杆菌质粒DNA的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.1.2 芽胞杆菌基因组DNA小量抽提 | 第30页 |
| 2.2.1.3 地衣芽胞杆菌质粒DNA提取 | 第30-31页 |
| 2.2.1.4 DNA体外重组操作 | 第31页 |
| 2.2.1.5 PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.2 大肠杆菌重组质粒转化 | 第32-33页 |
| 2.2.2.1 大肠杆菌氯化钙法感受态制备及转化 | 第32页 |
| 2.2.2.2 大肠杆菌转化的菌落PCR验证 | 第32-33页 |
| 2.2.3 地衣芽胞杆菌温敏型敲除质粒的构建 | 第33页 |
| 2.2.4 地衣芽胞杆菌重组质粒转化 | 第33-34页 |
| 2.2.4.1 地衣芽胞杆菌电转化感受态制备和电转化 | 第33-34页 |
| 2.2.4.2 地衣芽胞杆菌转化子的验证 | 第34页 |
| 2.2.5 地衣芽胞杆菌基因敲除方法 | 第34-35页 |
| 2.2.6 发酵条件 | 第35页 |
| 2.3 分析方法 | 第35-38页 |
| 2.3.1 生物量和葡萄糖检测 | 第35-36页 |
| 2.3.2 LC-MS鉴定表面活性物质 | 第36页 |
| 2.3.3 Lichenysin产量的检测 | 第36-37页 |
| 2.3.4 群游与生物膜实验 | 第37页 |
| 2.3.5 数据处理 | 第37-38页 |
| 3 结果和分析 | 第38-54页 |
| 3.1 表面活性物质Lichenysin的鉴定 | 第38-41页 |
| 3.1.1 地衣芽胞杆菌Lichenysin合成基因的确定 | 第38页 |
| 3.1.2 表面活性物质Lichenysin的LC-MS鉴定 | 第38-41页 |
| 3.2 Lichenysin整合型超表达株与缺失株构建 | 第41-51页 |
| 3.2.1 Lichenysin整合型超表达菌株WX-02 P43lchA构建 | 第41-45页 |
| 3.2.1.1 整合型超表达载体T2PlchA:P43构建 | 第41-44页 |
| 3.2.1.2 Lichenysin整合型超表达株构建 | 第44-45页 |
| 3.2.2 Lichenysin及ComS合成同时缺失株构建 | 第45-48页 |
| 3.2.2.1 PlchA敲除载体T2△PlchA构建 | 第45-47页 |
| 3.2.2.2 Lichenysin及ComS合成缺失株WX-02 △PlchA构建 | 第47-48页 |
| 3.2.3 Lichenysin合成缺失株构建 | 第48-51页 |
| 3.2.3.1 lchAC敲除载体T2△lchAC的构建 | 第48-50页 |
| 3.2.3.2 Lichenysin缺失株WX-02 △lchAC构建 | 第50-51页 |
| 3.3 野生型与工程菌Lichenysin产量的差异 | 第51-52页 |
| 3.4 野生型与工程菌群游及生物膜形成能力的差异 | 第52-54页 |
| 3.4.1 野生型与工程菌群游能力差异 | 第52-53页 |
| 3.4.2 野生型与工程菌生物膜形成能力的差异 | 第53-54页 |
| 4 讨论与展望 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63页 |
