| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-31页 |
| 1.1 产肠毒素性大肠杆菌 | 第15-16页 |
| 1.2 绿色荧光蛋白 | 第16-19页 |
| 1.2.1 GFP的结构 | 第17页 |
| 1.2.2 GFP的优点 | 第17-18页 |
| 1.2.3 GFP的应用 | 第18-19页 |
| 1.3 黏膜免疫系统 | 第19-22页 |
| 1.3.1 肠上皮细胞 | 第19-20页 |
| 1.3.2 粘液 | 第20页 |
| 1.3.3 IgA | 第20-21页 |
| 1.3.4 抗菌肽 | 第21页 |
| 1.3.5 上皮内淋巴细胞 | 第21-22页 |
| 1.4 sIgA | 第22-28页 |
| 1.4.1 IgA结构与功能 | 第22-24页 |
| 1.4.2 与sIgA功能相关的保护作用机制 | 第24-25页 |
| 1.4.3 sIgA抗体中SC功能 | 第25-26页 |
| 1.4.4 sIgA在控制上皮运输中的作用 | 第26页 |
| 1.4.5 sIgA在调节微生物群中的作用 | 第26-28页 |
| 1.5 乳酸菌 | 第28页 |
| 1.6 研究的目的与意义 | 第28-31页 |
| 2 材料与方法 | 第31-51页 |
| 2.1 K99蛋白纯化及抗血清的制备 | 第31-33页 |
| 2.1.1 材料 | 第31-32页 |
| 2.1.2 方法 | 第32-33页 |
| 2.2 融合表达ETEC K99、eGFP重组干酪乳杆菌的构建 | 第33-45页 |
| 2.2.1 材料 | 第33-34页 |
| 2.2.2 方法 | 第34-45页 |
| 2.3 重组干酪乳杆菌的免疫功能的研究 | 第45-51页 |
| 2.3.1 材料 | 第45-46页 |
| 2.3.2 方法 | 第46-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-71页 |
| 3.1 K99蛋白纯化及抗血清的制备 | 第51-52页 |
| 3.1.1 K99蛋白纯化的SDS-PAGE结果 | 第51页 |
| 3.1.2 纯化蛋白的Western Blot检测结果 | 第51页 |
| 3.1.3 兔源K99多抗血清抗体效价的检测 | 第51-52页 |
| 3.2 融合表达ETEC K99、eGFP重组干酪乳杆菌的构建 | 第52-59页 |
| 3.2.1 K99基因及eGFP基因的PCR扩增结果 | 第52-54页 |
| 3.2.2 重组质粒的酶切鉴定结果 | 第54页 |
| 3.2.3 PCR扩增大肠杆菌转化子的结果 | 第54页 |
| 3.2.4 测序结果 | 第54-55页 |
| 3.2.5 重组大肠杆菌表达eGFP的荧光检测结果 | 第55页 |
| 3.2.6 重组蛋白的Western Blot检测结果 | 第55页 |
| 3.2.7 PCR扩增干酪乳杆菌转化子的结果 | 第55-58页 |
| 3.2.8 干酪乳杆菌表达重组蛋白的Western Blot检测 | 第58页 |
| 3.2.9 重组干酪乳杆菌表达绿色荧光蛋白的荧光检测结果 | 第58页 |
| 3.2.10 流式细胞术鉴定外源蛋白表达 | 第58页 |
| 3.2.11 激光共聚焦鉴定外源蛋白在干酪乳杆菌表面的定位 | 第58-59页 |
| 3.3 重组干酪乳杆菌的免疫功能的研究 | 第59-71页 |
| 3.3.1 血清中K99特异性IgG抗体的检测 | 第59页 |
| 3.3.2 粪便中K99特异性sIgA抗体的检测 | 第59-60页 |
| 3.3.3 肠洗液中K99特异性sIgA抗体的检测 | 第60页 |
| 3.3.4 细胞因子检测结果 | 第60-62页 |
| 3.3.5 小鼠PP结及肠道组织冰冻切片的免疫组化结果 | 第62-71页 |
| 4 讨论 | 第71-75页 |
| 4.1 融合表达ETEC K99、eGFP重组干酪乳杆菌的构建 | 第71-72页 |
| 4.2 重组干酪乳杆菌的免疫功能的研究 | 第72-75页 |
| 5 结论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 个人简历 | 第93-95页 |
| 附录 1 | 第95-97页 |
| 附录 2 | 第97-98页 |
