| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 1 前言 | 第9-21页 |
| 1.1 酿酒酵母 | 第9-11页 |
| 1.1.1 酿酒酵母概述 | 第9页 |
| 1.1.2 酿酒酵母的应用现状 | 第9-11页 |
| 1.1.3 应用酿酒酵母存在的问题及开发前景 | 第11页 |
| 1.2 蛋白质-肽连接反应概述 | 第11-17页 |
| 1.2.1 相关名词解释 | 第11-12页 |
| 1.2.2 自发形成的异肽键指导蛋白质-肽连接反应的背景 | 第12-14页 |
| 1.2.3 SpyLigase系统与SpyTag/SpyCatcher反应概述 | 第14-15页 |
| 1.2.4 以SpyTag为基础的技术的目前应用 | 第15-16页 |
| 1.2.5 对SpyLigase系统与SpyTag/SpyCatcher反应的展望 | 第16-17页 |
| 1.3 质粒及基因序列概述 | 第17-19页 |
| 1.3.1 质粒YEplac112概述 | 第17页 |
| 1.3.2 质粒YEplac181概述 | 第17-18页 |
| 1.3.3 质粒YEplac195概述 | 第18页 |
| 1.3.4 基因片段PSLT概述 | 第18-19页 |
| 1.3.5 基因片段HSTeG概述 | 第19页 |
| 1.3.6 基因片段RKTHA概述 | 第19页 |
| 1.4 本论文的研究目的与意义及主要研究内容 | 第19-21页 |
| 1.4.1 本论文的研究目的与意义 | 第19页 |
| 1.4.2 本论文的主要研究内容 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.1 目的基因 | 第21页 |
| 2.1.2 质粒载体 | 第21页 |
| 2.1.3 实验菌株 | 第21页 |
| 2.2 实验试剂 | 第21-23页 |
| 2.3 实验设备 | 第23-24页 |
| 2.4 实验用培养基的配制 | 第24页 |
| 2.5 实验用溶液的配制 | 第24-25页 |
| 2.6 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.6.1 大肠杆菌Top10菌株感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第25-26页 |
| 2.6.2 大肠杆菌Top10菌株感受态细胞的转化 | 第26页 |
| 2.6.3 酿酒酵母W303菌株的转化(电转化法) | 第26页 |
| 2.6.4 质粒DNA的酶切体系 | 第26-27页 |
| 2.6.5 质粒DNA的连接体系 | 第27-28页 |
| 2.6.6 质粒DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
| 2.6.7 酵母菌生长特性的测定 | 第28-29页 |
| 3 结果与讨论 | 第29-49页 |
| 3.1 质粒YEplac112-PSLT、YEplac181-PT-HSTeG和YEplac195-PT-RKTHA的构建 | 第29-38页 |
| 3.1.1 质粒YEplac112-PSLT的构建 | 第29-31页 |
| 3.1.2 质粒YEplac181-PSLT的构建 | 第31-32页 |
| 3.1.3 质粒YEplac181-PT-HSTeG的构建 | 第32-34页 |
| 3.1.4 质粒YEplac195-PSLT的构建 | 第34-36页 |
| 3.1.5 质粒YEplac195-PT-RKTHA的构建 | 第36-38页 |
| 3.2 酿酒酵母W303菌株的转化 | 第38-41页 |
| 3.3 转化菌株生长特性的测定 | 第41-44页 |
| 3.3.1 酿酒酵母W303([YEplac112-PSLT]; [YEplac181-PT-HSTeG];[YEplac195-PT-RKTHA])菌株的生长特性 | 第41-42页 |
| 3.3.2 酿酒酵母W303([YEplac112];[YEplac181];[YEplac195])菌株的生长特性 | 第42页 |
| 3.3.3 酿酒酵母W303[YEplac181-PT-HSTeG]菌株的生长特性 | 第42-43页 |
| 3.3.4 酿酒酵母W303[YEplac195-PT-RKTHA]菌株的生长特性 | 第43页 |
| 3.3.5 酿酒酵母W303([YEplac181-PT-HSTeG];[YEplac195-PT-RKTHA])菌株的生长特性 | 第43-44页 |
| 3.4 转化菌株的荧光检测 | 第44-49页 |
| 3.4.1 酿酒酵母W303([YEplac112];[YEplac181];[YEplac195])菌株的荧光检测结果 | 第44-45页 |
| 3.4.2 酿酒酵母W303[YEplac181-PT-HSTeG]菌株的荧光检测结果 | 第45页 |
| 3.4.3 酿酒酵母W303[YEplac195-PT-RKTHA]菌株的荧光检测结果 | 第45-46页 |
| 3.4.4 酿酒酵母W303([YEplac181-PT-HSTeG];[YEplac195-PT-RKTHA])菌株的荧光检测结果 | 第46-47页 |
| 3.4.5 酿酒酵母W303([YEplac112-PSLT];[YEplac181-PT-HSTeG];[YEplac195-PT-RKTHA])菌株的荧光检测结果 | 第47-49页 |
| 4 结论 | 第49-50页 |
| 5 展望 | 第50-51页 |
| 6 参考文献 | 第51-58页 |
| 7 攻读工程硕士学位期间发表论文情况 | 第58-59页 |
| 8 致谢 | 第59-61页 |
| 附录1 基因片段PSLT序列 | 第61-62页 |
| 附录2 基因片段RKTHA序列 | 第62-63页 |
| 附录3 基因片段HSTeG序列 | 第63页 |
