| 中文摘要 | 第13-16页 |
| 英文摘要 | 第16-19页 |
| 1 前言 | 第20-34页 |
| 1.1 苏云金杆菌在蚊虫防治中的应用 | 第20-21页 |
| 1.2 昆虫宿主对病原微生物的应答机制 | 第21-24页 |
| 1.2.1 昆虫对病原微生物的防御机制 | 第21-22页 |
| 1.2.2 宿主对Bt及Cry毒素应答机制 | 第22-23页 |
| 1.2.3 蚊虫对Bt侵染的应答机制研究 | 第23-24页 |
| 1.3 RNAi技术在害虫防治中的应用 | 第24-28页 |
| 1.3.1 RNA干扰的定义 | 第24-26页 |
| 1.3.2 RNAi技术在害虫防治中的应用 | 第26页 |
| 1.3.3 影响RNAi沉默效果的因素 | 第26-27页 |
| 1.3.4 dsRNA导入方法的比较 | 第27-28页 |
| 1.4 菌糠的生物质转化研究 | 第28-33页 |
| 1.4.1 纤维素原料的预处理 | 第29-32页 |
| 1.4.1.1 物理法 | 第29-30页 |
| 1.4.1.2 物理化学法 | 第30页 |
| 1.4.1.3 化学预处理 | 第30-31页 |
| 1.4.1.4 生物预处理 | 第31-32页 |
| 1.4.2 水解作用 | 第32-33页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第33-34页 |
| 2 埃及伊蚊抵御Bt侵染的转录组分析 | 第34-49页 |
| 2.1 材料与方法 | 第34-37页 |
| 2.1.1 供试菌株和蚊虫 | 第34-35页 |
| 2.1.2 生物测定 | 第35页 |
| 2.1.3 活体荧光观察 | 第35页 |
| 2.1.4 埃及伊蚊石蜡切片观察 | 第35-36页 |
| 2.1.5 RNA制备、cDNA文库构建以及测序 | 第36页 |
| 2.1.6 RNA-seq测序数据分析 | 第36-37页 |
| 2.1.7 RT-qPCR验证 | 第37页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第37-45页 |
| 2.2.1 Bt菌株LLP29在埃及伊蚊幼虫体内的分布情况 | 第37-40页 |
| 2.2.2 埃及伊蚊受Bt侵染后的数字基因表达谱分析(DGE) | 第40-42页 |
| 2.2.3 埃及伊蚊对Bt侵染的应答 | 第42-45页 |
| 2.2.3.1 先天免疫 | 第43-44页 |
| 2.2.3.2 解毒作用 | 第44页 |
| 2.2.3.3 影响受体结合 | 第44页 |
| 2.2.3.4 细胞凋亡与细胞增殖 | 第44-45页 |
| 2.2.3.5 围食膜几丁质合成代谢相关蛋白 | 第45页 |
| 2.3 讨论 | 第45-48页 |
| 2.4 小结 | 第48-49页 |
| 3 埃及伊蚊抵御Bt侵染过程关键基因的功能鉴定 | 第49-74页 |
| 3.1 材料与方法 | 第49-61页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第49-50页 |
| 3.1.1.1 供试载体和菌株 | 第49页 |
| 3.1.1.2 供试蚊虫 | 第49-50页 |
| 3.1.2 克隆载体的构建 | 第50-54页 |
| 3.1.2.1 埃及伊蚊Total RNA的提取 | 第50页 |
| 3.1.2.2 Total RNA反转录成cDNA | 第50-51页 |
| 3.1.2.3 引物设计 | 第51-52页 |
| 3.1.2.4 PCR扩增目的基因 | 第52页 |
| 3.1.2.5 PCR产物的回收 | 第52-53页 |
| 3.1.2.6 pMD-18T克隆载体 | 第53页 |
| 3.1.2.7 大肠杆菌JM109感受态细胞的制备 | 第53-54页 |
| 3.1.2.8 转化和筛选 | 第54页 |
| 3.1.2.9 碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA | 第54页 |
| 3.1.2.10 测序 | 第54页 |
| 3.1.3 dsRNA表达载体的构建 | 第54-56页 |
| 3.1.3.1 质粒DNA的提取 | 第54-55页 |
| 3.1.3.2 质粒DNA双酶切 | 第55-56页 |
| 3.1.3.3 酶切产物的回收 | 第56页 |
| 3.1.3.4 pLitmus-28i表达载体的构建 | 第56页 |
| 3.1.3.5 大肠杆菌HT115感受态细胞的制备 | 第56页 |
| 3.1.3.6 转化、筛选及测序 | 第56页 |
| 3.1.4 目的基因dsRNA的诱导表达及提取 | 第56-57页 |
| 3.1.4.1 dsRNA的诱导表达 | 第56-57页 |
| 3.1.4.2 dsRNA的提取 | 第57页 |
| 3.1.5 dsRNA的包埋 | 第57-58页 |
| 3.1.5.1 蚊子幼虫人工饲料配制 | 第57-58页 |
| 3.1.5.2 壳聚糖/dsRNA纳米微粒的制备 | 第58页 |
| 3.1.6 RNAi饲喂试验以及生物测定 | 第58-61页 |
| 3.1.6.1 壳聚糖/dsRNA纳米微粒饲喂幼虫 | 第58页 |
| 3.1.6.2 幼虫饲喂dsRNA后的Total RNA提取 | 第58-59页 |
| 3.1.6.3 Total RNA的反转录 | 第59页 |
| 3.1.6.4 Quantitative Real-Time PCR | 第59-60页 |
| 3.1.6.5 生物测定 | 第60-61页 |
| 3.2 结果与分析 | 第61-71页 |
| 3.2.1 克隆载体的构建 | 第61-62页 |
| 3.2.2 dsRNA表达载体的构建 | 第62-65页 |
| 3.2.3 dsRNA的诱导表达及提取 | 第65-66页 |
| 3.2.4 壳聚糖/dsRNA纳米微粒制备 | 第66-67页 |
| 3.2.5 RT-qPCR分析沉默效果 | 第67-68页 |
| 3.2.6 生物测定结果分析 | 第68-71页 |
| 3.3 讨论 | 第71-73页 |
| 3.4 小结 | 第73-74页 |
| 4 埃及伊蚊抵御Bt侵染的生理生化响应 | 第74-94页 |
| 4.1 材料与方法 | 第74-84页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第74-75页 |
| 4.1.1.1 供试菌株和虫源 | 第74页 |
| 4.1.1.2 化学试剂 | 第74-75页 |
| 4.1.1.3 仪器设备 | 第75页 |
| 4.1.2 粗酶液的制备 | 第75-76页 |
| 4.1.2.1 酶液提取 | 第75页 |
| 4.1.2.2 蛋白质浓度的测定 | 第75-76页 |
| 4.1.3 淀粉酶活性的测定 | 第76-78页 |
| 4.1.4 蛋白酶活性的测定 | 第78-79页 |
| 4.1.5 Na~+/K~+-ATP酶活性测定 | 第79-81页 |
| 4.1.6 乙酰胆碱酯酶活性测定 | 第81-82页 |
| 4.1.7 谷胱甘肽-S转移酶活性测定 | 第82-83页 |
| 4.1.8 GSH和GSSG含量的测定 | 第83页 |
| 4.1.9 细胞色素P450酶活测定 | 第83-84页 |
| 4.2 结果与分析 | 第84-90页 |
| 4.2.1 Bti侵染对埃及伊蚊幼虫淀粉酶活性的影响 | 第84-85页 |
| 4.2.2 Bti侵染对埃及伊蚊幼虫蛋白酶活性的影响 | 第85-87页 |
| 4.2.3 Bti侵染对埃及伊蚊幼虫Na+/K+-ATP酶活性的影响 | 第87页 |
| 4.2.4 Bti侵染对埃及伊蚊幼虫乙酰胆碱酯酶活性的影响 | 第87-88页 |
| 4.2.5 Bti侵染对埃及伊蚊幼虫谷胱甘肽-S转移酶活性的影响 | 第88-89页 |
| 4.2.6 Bti侵染对埃及伊蚊幼虫细胞色素P450酶活性的影响 | 第89-90页 |
| 4.3 讨论 | 第90-93页 |
| 4.4 小结 | 第93-94页 |
| 5 菌糠生物质转化Bt培养基的前处理条件筛选和配方优化 | 第94-117页 |
| 5.1 材料与方法 | 第95-101页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第95-96页 |
| 5.1.1.1 供试菌株 | 第95页 |
| 5.1.1.2 菌糠 | 第95页 |
| 5.1.1.3 化学试剂 | 第95页 |
| 5.1.1.4 仪器 | 第95-96页 |
| 5.1.2 菌糠的成份分析 | 第96-97页 |
| 5.1.2.1 水分的测定 | 第96页 |
| 5.1.2.2 灰分的测定 | 第96页 |
| 5.1.2.3 热水提取物 | 第96页 |
| 5.1.2.4 苯醇提取物 | 第96页 |
| 5.1.2.5 纤维素酸、半纤维素、酸溶木质素和酸不溶木质素 | 第96-97页 |
| 5.1.3 菌糠前处理 | 第97页 |
| 5.1.4 酶水解 | 第97页 |
| 5.1.5 还原糖的测定 | 第97页 |
| 5.1.6 HPLC测定 | 第97-98页 |
| 5.1.6.1 衍生物的制备 | 第97-98页 |
| 5.1.6.2 色谱条件 | 第98页 |
| 5.1.7 浸提液发酵效果初筛 | 第98-99页 |
| 5.1.8 菌糠液态发酵培养基的优化 | 第99-100页 |
| 5.1.8.1 单因素试验 | 第99页 |
| 5.1.8.2 Plackett-Burman设计 | 第99页 |
| 5.1.8.3 最陡爬坡试验 | 第99-100页 |
| 5.1.8.4 响应面分析(RSM) | 第100页 |
| 5.1.9 芽孢数与生物测定 | 第100-101页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第101-116页 |
| 5.2.1 利用菌糠培养苏云金杆菌的前处理研究 | 第101-108页 |
| 5.2.1.1 菌糠成分分析 | 第101页 |
| 5.2.1.2 稀硫酸前处理 | 第101页 |
| 5.2.1.3 氢氧化钠前处理 | 第101-102页 |
| 5.2.1.4 氢氧化钙前处理 | 第102页 |
| 5.2.1.5 热水前处理 | 第102-105页 |
| 5.2.1.6 菌糠前处理水解产物的单糖组成 | 第105-106页 |
| 5.2.1.7 酶水解 | 第106页 |
| 5.2.1.8 不同前处理的芽孢产量 | 第106-108页 |
| 5.2.2 利用菌糠浸提液制备苏云金杆菌及其培养基优化 | 第108-116页 |
| 5.2.2.1 单因素试验选择最优的氮源和金属离子 | 第108-110页 |
| 5.2.2.2 Plackett-Burman设计 | 第110-111页 |
| 5.2.2.3 最陡爬坡试验 | 第111-112页 |
| 5.2.2.4 响应面分析优化培养基组成 | 第112-114页 |
| 5.2.2.5 最优配方的验证 | 第114-116页 |
| 5.3 小结 | 第116-117页 |
| 6 菌糠固态培养基的制备及其效价成本分析 | 第117-130页 |
| 6.1 材料与方法 | 第117-121页 |
| 6.1.1 试验材料 | 第117-118页 |
| 6.1.1.1 培养基 | 第117-118页 |
| 6.1.1.2 试验菌株 | 第118页 |
| 6.1.1.3 供试虫源 | 第118页 |
| 6.1.1.4 供试菌糠 | 第118页 |
| 6.1.2 菌糠营养成分分析 | 第118-119页 |
| 6.1.2.1 有机质及热水提取物的测定 | 第118页 |
| 6.1.2.2 纤维素与半纤维素测定 | 第118页 |
| 6.1.2.3 可溶性碳(DOC)和微生物碳(MBC)的测定 | 第118页 |
| 6.1.2.4 硝态氮、氨基氮和有效磷的测定 | 第118-119页 |
| 6.1.3 固态补料发酵试验 | 第119-120页 |
| 6.1.3.1 固态发酵条件 | 第119页 |
| 6.1.3.2 发酵过程指标测定 | 第119页 |
| 6.1.3.3 发酵后指标测定 | 第119-120页 |
| 6.1.4 发酵培养条件的优化 | 第120页 |
| 6.1.4.1 温度对发酵的影响 | 第120页 |
| 6.1.4.2 初始pH值对发酵产物毒力的影响 | 第120页 |
| 6.1.4.3 料水比对发酵产物毒力的影响 | 第120页 |
| 6.1.4.4 粒度对发酵产物毒力的影响 | 第120页 |
| 6.1.4.5 接种量对发酵产物毒力的影响 | 第120页 |
| 6.1.5 放大培养 | 第120页 |
| 6.1.6 Bt菌糠培养物的持效性测定 | 第120-121页 |
| 6.1.7 统计分析 | 第121页 |
| 6.2 结果与讨论 | 第121-129页 |
| 6.2.1 菌糠营养成分分析 | 第121-122页 |
| 6.2.2 固态补料发酵试验 | 第122-123页 |
| 6.2.3 发酵条件优化 | 第123-126页 |
| 6.2.3.1 温度对发酵产物毒力的影响 | 第123页 |
| 6.2.3.2 初始pH值对发酵产物毒力的影响 | 第123-124页 |
| 6.2.3.3 料水比对发酵产物毒力的影响 | 第124页 |
| 6.2.3.4 粒度对发酵产物毒力的影响 | 第124页 |
| 6.2.3.5 接种量对发酵产物毒力的影响 | 第124-126页 |
| 6.2.4 放大培养物的效价测定和持效性分析 | 第126-127页 |
| 6.2.5 发酵原料成本换算 | 第127-129页 |
| 6.3 小结 | 第129-130页 |
| 7 全文小结与展望 | 第130-133页 |
| 7.1 全文小结 | 第130-131页 |
| 7.2 本研究的特色与创新 | 第131-132页 |
| 7.3 展望 | 第132-133页 |
| 参考文献 | 第133-149页 |
| 附录 | 第149-169页 |
| 附表1 RT-qPCR引物 | 第149-151页 |
| 附表2 差异表达基因的表达水平及其功能分类 | 第151-155页 |
| 附录3 化学试剂及其配制 | 第155-159页 |
| 附录4 测序结果及其比对分析 | 第159-162页 |
| 附表5 菌糠成份分析方法 | 第162-169页 |
| 致谢 | 第169-170页 |
| 个人简介 | 第170-171页 |
