| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-18页 |
| 1.1 紫色杆菌素 | 第10-13页 |
| 1.1.1 天然产紫色杆菌素的细菌种类 | 第10页 |
| 1.1.2 紫色杆菌素的生理活性和功能 | 第10-12页 |
| 1.1.2.1 抗菌活性 | 第10-11页 |
| 1.1.2.2 抗肿瘤活性 | 第11-12页 |
| 1.1.2.3 抗寄生虫活性 | 第12页 |
| 1.1.2.4 抗病毒活性 | 第12页 |
| 1.1.3 紫色杆菌素的结构和生物合成途径 | 第12-13页 |
| 1.2 紫色杆菌素的生产 | 第13-16页 |
| 1.2.1 天然菌的生产 | 第13-14页 |
| 1.2.2 异源宿主生产紫色杆菌素 | 第14-16页 |
| 1.3 谷氨酸棒状杆菌和色氨酸的生产 | 第16-17页 |
| 1.4 本课题的研究内容和创新点 | 第17-18页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第17页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-36页 |
| 2.1 试验材料 | 第18-25页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.2 溶液的配置 | 第19-20页 |
| 2.1.3 试验设备 | 第20-21页 |
| 2.1.4 菌种和质粒 | 第21-22页 |
| 2.1.5 引物 | 第22-24页 |
| 2.1.6 培养基 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.2.1 菌株培养和发酵 | 第25-26页 |
| 2.2.2 L-色氨酸标准曲线的绘制 | 第26页 |
| 2.2.3 紫色杆菌素的提取和检测 | 第26-27页 |
| 2.2.3.1 紫色杆菌素的提取 | 第26页 |
| 2.2.3.2 紫色杆菌素粗提物的制备 | 第26页 |
| 2.2.3.3 紫色杆菌素标准曲线的绘制 | 第26-27页 |
| 2.2.4 分子操作实验 | 第27-31页 |
| 2.2.4.1 基因组的提取 | 第27页 |
| 2.2.4.2 质粒的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.4.3 PCR反应体系 | 第28-29页 |
| 2.2.4.4 DNA片段的琼脂糖凝胶回收 | 第29页 |
| 2.2.4.5 Golden Gate反应体系和条件 | 第29-30页 |
| 2.2.4.6 质粒的化学转化 | 第30页 |
| 2.2.4.7 质粒的鉴定 | 第30页 |
| 2.2.4.8 谷氨酸棒状杆菌感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.4.9 谷氨酸棒状杆菌感受态细胞的电转化 | 第31页 |
| 2.2.5 质粒的构建 | 第31-36页 |
| 2.2.5.1 pEC-J-vio1质粒的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.5.2 pEC-J-vio2质粒的构建 | 第33页 |
| 2.2.5.3 pEC-C-vio1质粒的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.5.4 pEC-C-vio2质粒的构建 | 第34-35页 |
| 2.2.5.5 pEC-vioABCDE质粒的构建 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第36-58页 |
| 3.1 质粒构建相关结果 | 第36-46页 |
| 3.1.1 pEC-J-vio1质粒的构建 | 第36-38页 |
| 3.1.1.1 Janthinobacterium lividum基因组的提取 | 第36页 |
| 3.1.1.2 装配DNA片段的获得 | 第36-37页 |
| 3.1.1.3 质粒的构建 | 第37页 |
| 3.1.1.4 质粒的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.1.2 pEC-J-vio2质粒的构建 | 第38-40页 |
| 3.1.2.1 SD序列的获取 | 第38页 |
| 3.1.2.2 装配DNA片段的获得 | 第38-39页 |
| 3.1.2.3 质粒的构建 | 第39页 |
| 3.1.2.4 质粒的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.3 pEC-C-vio1质粒的构建 | 第40-42页 |
| 3.1.3.1 装配DNA片段的获得 | 第40页 |
| 3.1.3.2 质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.1.3.3 质粒的鉴定 | 第41-42页 |
| 3.1.4 pEC-C-vio2质粒的构建 | 第42-44页 |
| 3.1.4.1 装配DNA片段的获得 | 第42-43页 |
| 3.1.4.2 质粒的构建 | 第43页 |
| 3.1.4.3 质粒的鉴定 | 第43-44页 |
| 3.1.5 pEC-vioABCDE质粒的构建 | 第44-46页 |
| 3.1.5.1 装配DNA片段的获得 | 第44页 |
| 3.1.5.2 质粒的构建 | 第44-45页 |
| 3.1.5.3 质粒的鉴定 | 第45-46页 |
| 3.2 L-色氨酸标准曲线的绘制 | 第46页 |
| 3.3 紫色杆菌素标准曲线的绘制 | 第46-47页 |
| 3.4 紫色杆菌素摇瓶发酵结果与讨论 | 第47-52页 |
| 3.4.1 来自Janthinobacterium lividum的功能基因发酵结果 | 第48-50页 |
| 3.4.2 来自Chromobacterium violaceum的功能基因发酵结果 | 第50页 |
| 3.4.3 不同来源的功能基因发酵结果差异 | 第50-52页 |
| 3.5 丰富培养基中的发酵结果 | 第52-53页 |
| 3.6 C. glutamicum ATCC 21850 pEC-C-vio1诱导剂浓度的优化 | 第53-54页 |
| 3.7 C. glutamicum ATCC 21850 pEC-C-vio1的发酵温度优化 | 第54页 |
| 3.8 C. glutamicum ATCC 21850 pEC-C-vio1诱导剂添加时间的优化 | 第54-55页 |
| 3.9 C. glutamicum ATCC 21850 pEC-C-vio1的分批补料发酵 | 第55-58页 |
| 第四章 结论和展望 | 第58-60页 |
| 4.1 结论 | 第58页 |
| 4.2 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
