| 摘要 | 第8-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 符号与缩略语说明 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-50页 |
| 1 放线菌及其研究现状 | 第16-18页 |
| 1.1 放线菌概述 | 第16页 |
| 1.2 放线菌分类 | 第16-17页 |
| 1.3 放线菌:天然活性物质的生物合成工厂 | 第17-18页 |
| 2 纤维蛋白酶研究进展及微生物源纤维蛋白酶简介 | 第18-26页 |
| 2.1 血栓疾病简介 | 第18页 |
| 2.2 血栓形成 | 第18页 |
| 2.3 凝血与溶血基本原理 | 第18-22页 |
| 2.4 纤维蛋白酶治疗血栓策略 | 第22-23页 |
| 2.5 微生物来源纤维蛋白酶的探索 | 第23-26页 |
| 3 放线菌源α-淀粉酶抑制剂研究进展 | 第26-35页 |
| 3.1 非蛋白质类α-淀粉酶抑制剂 | 第26-32页 |
| 3.2 蛋白类α-淀粉酶抑制剂 | 第32-35页 |
| 4 本研究的意义与立题依据 | 第35-37页 |
| 参考文献 | 第37-50页 |
| 第二章 土壤中放线菌资源收集与活性物质的筛选 | 第50-84页 |
| 第一节 放线菌的分离及初步鉴定 | 第50-63页 |
| 1 材料与方法 | 第50-57页 |
| 1.1 材料 | 第50-52页 |
| 1.2 实验方法 | 第52-57页 |
| 2 结果 | 第57-63页 |
| 2.1 放线菌的分离 | 第57-58页 |
| 2.2 放线菌16S rRNA基因扩增 | 第58-60页 |
| 2.3 放线菌16S rRNA基因酶切分型及测序 | 第60-62页 |
| 2.4 纤维蛋白酶的筛选 | 第62页 |
| 2.5 淀粉酶抑制剂的筛选 | 第62-63页 |
| 第二节 菌株CC5的相关菌种性质鉴定 | 第63-74页 |
| 1 材料与方法 | 第63-67页 |
| 1.1 菌株 | 第63页 |
| 1.2 主要试剂 | 第63页 |
| 1.3 主要仪器 | 第63页 |
| 1.4 培养基及主要试剂配制 | 第63页 |
| 1.5 实验方法 | 第63-67页 |
| 2 结果 | 第67-74页 |
| 2.1 菌株CC5的基本形态特征 | 第67-68页 |
| 2.2 菌株CC5的培养特征 | 第68-69页 |
| 2.3 菌株CC5的基本生理生化特性及碳源利用 | 第69页 |
| 2.4 菌株CC5的16S rRNA基因序列分析 | 第69-70页 |
| 2.5 Streptomyces sp.CC5其他天然活性产物 | 第70-74页 |
| 本章讨论 | 第74-80页 |
| 本章小结 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-84页 |
| 第三章 Streptomyces sp.CC5中纤维蛋白酶AfeE的分离纯化和基因克隆 | 第84-114页 |
| 第一节 纤维蛋白酶的分离纯化 | 第84-90页 |
| 1 材料与方法 | 第84-87页 |
| 1.1 实验材料 | 第84-85页 |
| 1.2 实验方法 | 第85-87页 |
| 2 结果 | 第87-90页 |
| 2.1 样品浓缩和初步除杂 | 第87页 |
| 2.2 硫酸铵分级沉淀 | 第87-88页 |
| 2.3 Superdex 200 10/300 GL凝胶层析结果 | 第88-89页 |
| 2.4 SDS-PAGE电泳及HRMS分析 | 第89页 |
| 2.5 肽指纹图谱分析 | 第89-90页 |
| 第二节 纤维蛋白酶AfeE的酶学性质评估及基因克隆 | 第90-106页 |
| 1 材料与方法 | 第90-98页 |
| 1.1 实验材料 | 第90-91页 |
| 1.2 实验方法 | 第91-98页 |
| 2 结果 | 第98-106页 |
| 2.1 温度对AfeE的水解活性和稳定性影响 | 第98页 |
| 2.2 pH对AfeE的水解活性和稳定性影响 | 第98-99页 |
| 2.3 金属离子对AfeE的水解活性影响 | 第99-100页 |
| 2.4 蛋白酶抑制剂对AfeE的水解活性影响 | 第100-102页 |
| 2.5 AfeE的底物水解特异性 | 第102-103页 |
| 2.6 纤维蛋白平板法评估AfeE对纤维蛋白的水解活性 | 第103页 |
| 2.7 SDS-PAGE法评估AfeE对纤维蛋白原和纤维蛋白的水解活性 | 第103-104页 |
| 2.8 afeE基因扩增 | 第104-105页 |
| 2.9 afeE基因分析 | 第105-106页 |
| 本章讨论 | 第106-108页 |
| 本章小结 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-114页 |
| 第四章 纤维蛋白酶AfeE溶栓活性评估 | 第114-130页 |
| 1 材料与方法 | 第115-119页 |
| 1.1 实验材料 | 第115页 |
| 1.2 实验方法 | 第115-119页 |
| 2 结果 | 第119-126页 |
| 2.1 角叉菜胶诱导的鼠尾血栓模型对AfeE溶栓活性评估 | 第119-122页 |
| 2.2 AfeE抗凝活性研究 | 第122-124页 |
| 2.3 小鼠出血实验 | 第124-125页 |
| 2.4 细胞毒性实验 | 第125-126页 |
| 本章讨论 | 第126-127页 |
| 本章小结 | 第127-129页 |
| 参考文献 | 第129-130页 |
| 第五章 α-淀粉酶抑制剂AAI-CC5的分离鉴定及克隆表达 | 第130-162页 |
| 第一节 AAI-CC5分离纯化与鉴定 | 第130-142页 |
| 1 材料与方法 | 第130-133页 |
| 1.1 实验材料 | 第130页 |
| 1.2 实验方法 | 第130-133页 |
| 2 结果 | 第133-142页 |
| 2.1 样品浓缩 | 第133页 |
| 2.2 硫酸铵分级沉淀 | 第133-134页 |
| 2.3 DEAE-Sepharose fast flow离子交换柱层析分离结果 | 第134-135页 |
| 2.4 Superdex 75 HR 10/300 GL凝胶层析结果 | 第135-137页 |
| 2.5 Starch-PAGE电泳分析 | 第137页 |
| 2.6 MALDI-TOF分析 | 第137-138页 |
| 2.7 肽指纹图谱分析和蛋白质N端测序 | 第138页 |
| 2.8 AAI-CC5的基本生理生化特性 | 第138-142页 |
| 第二节 AAI-CC5基因克隆与表达 | 第142-155页 |
| 1 材料与方法 | 第142-150页 |
| 1.1 实验材料 | 第142-143页 |
| 1.2 实验方法 | 第143-150页 |
| 2 结果 | 第150-155页 |
| 2.1 PCR扩增aaiE基因 | 第150-152页 |
| 2.2 表达载体pET29a(+)-maiE的构建 | 第152页 |
| 2.3 表达菌株活性验证 | 第152-153页 |
| 2.4 重组淀粉酶抑制剂(rAAI-CC5)的分离纯化 | 第153-154页 |
| 2.5 AAI-CC5序列分析 | 第154-155页 |
| 本章讨论 | 第155-158页 |
| 本章小结 | 第158-159页 |
| 参考文献 | 第159-162页 |
| 全文总结 | 第162-166页 |
| 主要创新点 | 第166-168页 |
| 不足之处与今后工作设想 | 第168-170页 |
| 附录 | 第170-184页 |
| 攻读博士学位期间学术成果 | 第184-186页 |
| 致谢 | 第186页 |
