| 摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-15页 |
| 第1章 前言 | 第16-26页 |
| 1.1 研究意义 | 第16-20页 |
| 1.1.1 二噁英类化合物的概述 | 第16页 |
| 1.1.2 二噁英类化合物的危害 | 第16-17页 |
| 1.1.3 二噁英类化合物的主要来源 | 第17-18页 |
| 1.1.4 二噁英类化合物污染的治理 | 第18-20页 |
| 1.2 微生物降解二噁英的研究现状 | 第20-24页 |
| 1.2.1 降解二苯并呋喃的微生物菌株 | 第20页 |
| 1.2.2 二苯并呋喃的降解途径 | 第20-23页 |
| 1.2.3 外二醇双加氧酶和水解酶编码基因 | 第23-24页 |
| 1.3 选题背景及意义 | 第24-26页 |
| 第2章 Rhodococcus sp. strain p52全基因组测序与外二醇双加氧酶和水解酶基因分布 | 第26-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-27页 |
| 2.1.1 基因组DNA的提取 | 第26页 |
| 2.1.2 基因组测序 | 第26页 |
| 2.1.3 基因组组装 | 第26-27页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第27-30页 |
| 2.2.1 Rhodococcus sp. strain p52基因组的基本信息 | 第27-28页 |
| 2.2.2 Rhodococcus sp. strain p52外二醇双加氧酶和水解酶基因的系统发育分析 | 第28-29页 |
| 2.2.3 Rhodococcus sp. strain p52外二醇双加氧酶和水解酶基因的分布 | 第29-30页 |
| 2.3 本章小结 | 第30-32页 |
| 第3章 Rhodococcus sp. strain p52外二醇双加氧酶基因dfdB的异源表达与功能研究 | 第32-52页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-42页 |
| 3.1.1 菌株和质粒载体 | 第32-34页 |
| 3.1.2 培养基与试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第34-35页 |
| 3.1.4 外二醇双加氧酶基因dfdB的异源表达 | 第35-41页 |
| 3.1.5 外二醇双加氧酶基因dfdB的功能验证 | 第41页 |
| 3.1.6 不同环境因素对外二醇双加氧酶DfdB活性的影响 | 第41-42页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第42-50页 |
| 3.2.1 Rhodococcus sp. strain p52基因组的提取及检测 | 第42-43页 |
| 3.2.2 PCR扩增外二醇双加氧酶基因dfdB及序列分析 | 第43-44页 |
| 3.2.3 克隆载体pET-32a(+)的构建与鉴定 | 第44页 |
| 3.2.4 筛选阳性克隆 | 第44-46页 |
| 3.2.5 外二醇双加氧酶基因dfdB的表达 | 第46-47页 |
| 3.2.6 外二醇双加氧酶基因dfdB的功能验证 | 第47-48页 |
| 3.2.7 环境因素对外二醇双加氧酶DfdB的活性影响 | 第48-50页 |
| 3.3 本章小结 | 第50-52页 |
| 第4章 Rhodococcus sp. strain p52水解酶基因dfdC的异源表达与功能验证 | 第52-60页 |
| 4.1 材料与方法 | 第52-54页 |
| 4.1.1 菌株与质粒载体 | 第52页 |
| 4.1.2 培养基与试剂 | 第52页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第52页 |
| 4.1.4 实验方法与步骤 | 第52-54页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第54-58页 |
| 4.2.1 水解酶基因dfdC的PCR扩增和序列分析 | 第54-55页 |
| 4.2.2 筛选阳性克隆 | 第55-57页 |
| 4.2.3 水解酶基因dfdC的表达 | 第57页 |
| 4.2.4 水解酶基因dfdC功能验证 | 第57-58页 |
| 4.3 本章小结 | 第58-60页 |
| 第5章 Rhodococcus sp. strain p52外二醇双加氧酶基因flnD的表达与包涵体复性 | 第60-70页 |
| 5.1 材料与方法 | 第60-63页 |
| 5.1.1 菌株与质粒载体 | 第60页 |
| 5.1.2 培养基与试剂 | 第60页 |
| 5.1.3 主要仪器 | 第60-61页 |
| 5.1.4 外二醇双加氧酶基因flnD的表达 | 第61-62页 |
| 5.1.5 包涵体的洗涤和变性 | 第62-63页 |
| 5.1.6 包涵体复性 | 第63页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第63-68页 |
| 5.2.1 PCR扩增flnD基因及序列分析 | 第63-64页 |
| 5.2.2 筛选阳性克隆 | 第64-66页 |
| 5.2.3 外二醇双加氧酶基因flnD的表达 | 第66-67页 |
| 5.2.4 包涵体蛋白的复性 | 第67-68页 |
| 5.3 本章小结 | 第68-70页 |
| 第6章 Rhodococcus sp. strain p52中水解酶基因flnE的异源表达 | 第70-76页 |
| 6.1 材料与方法 | 第70-71页 |
| 6.1.1 PCR技术扩增目的基因flnE | 第70页 |
| 6.1.2 PCR产物和质粒的双酶切 | 第70-71页 |
| 6.1.3 目的基因与载体连接 | 第71页 |
| 6.1.4 重组质粒转化至E.coli BL21(DE3) | 第71页 |
| 6.1.5 重组蛋白的聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳 | 第71页 |
| 6.2 结果与讨论 | 第71-74页 |
| 6.2.1 水解酶基因flnE的扩增 | 第71-72页 |
| 6.2.2 筛选阳性克隆 | 第72-74页 |
| 6.2.3 水解酶基因flnE的表达 | 第74页 |
| 6.3 本章小结 | 第74-76页 |
| 第7章 结论与建议 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第86-87页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第87页 |
