| 摘要 | 第6-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号说明 | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-25页 |
| 第一节 昆虫蜕皮变态发育概述 | 第14-15页 |
| 第二节 昆虫蜕皮变态发育的分子机制 | 第15-25页 |
| 一、20E信号途径 | 第15-22页 |
| 二、JH信号途径 | 第22-24页 |
| 三、本论文的科学问题和研究意义 | 第24-25页 |
| 第二章 G蛋白偶联受体2在细胞膜上控制20E信号 | 第25-64页 |
| 一、引言 | 第25-26页 |
| 二、实验材料及方法 | 第26-40页 |
| 1. 实验材料 | 第26-27页 |
| 2. 实验方法 | 第27-40页 |
| 2.1 基因的生物信息学分析及克隆 | 第27-28页 |
| 2.2 激素刺激 | 第28页 |
| 2.3 重组蛋白表达和多克隆抗体制备 | 第28-31页 |
| 2.4 免疫印迹 | 第31-33页 |
| 2.5 免疫共沉淀 | 第33页 |
| 2.6 RNA提取 | 第33-34页 |
| 2.7 反转录cDNA的合成 | 第34页 |
| 2.8 qRT-PCR(实时荧光定量PCR) | 第34-35页 |
| 2.9 虫体和细胞的RNA干扰 | 第35页 |
| 2.10 细胞质粒过表达 | 第35-36页 |
| 2.11 检测ErGPCR-2磷酸化水平 | 第36页 |
| 2.12 细胞膜与细胞质蛋白质分离 | 第36页 |
| 2.13 ChIP染色质免疫共沉淀(Carey et al.2009) | 第36-37页 |
| 2.14 [~3H]Pon A结合细胞及蛋白实验 | 第37-40页 |
| 三、实验结果 | 第40-59页 |
| 1. ErGPCR-2的基因克隆及序列分析 | 第40-43页 |
| 2. ErGPCR-2的原核表达及其多克隆抗体 | 第43页 |
| 3. 在蜕皮和变态过程中,20E上调ErGPCR-2的表达 | 第43-45页 |
| 4. ErGPCR-2参与了20E引起的变态 | 第45-47页 |
| 5. ErGPCR-2参与20E引起的快速的胞内反应以及基因转录 | 第47-52页 |
| 6. ErGPCR-2定位于细胞膜并且20E使其内吞 | 第52-55页 |
| 7. GRK2调节ErGPCR-2的磷酸化及内吞 | 第55-57页 |
| 8. ErGPCR-2决定了[~3H]PonA进入细胞 | 第57-59页 |
| 四、讨论 | 第59-63页 |
| 五、结论 | 第63-64页 |
| 第三章 类固醇激素20E促进细胞内钙离子动员诱导凋亡 | 第64-85页 |
| 一、引言 | 第64-65页 |
| 二、实验材料及方法 | 第65-67页 |
| 1. 实验材料 | 第65-66页 |
| 2. 实验方法 | 第66-67页 |
| 2.1 细胞内钙离子水平检测 | 第66页 |
| 2.2 Caspase 3/7活性检测 | 第66-67页 |
| 2.3 苔盼兰染色 | 第67页 |
| 2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第67页 |
| 2.5 qRT-PCR(实时荧光定量PCR) | 第67页 |
| 三、实验结果 | 第67-81页 |
| 1. 20E和JH分别通过GPCR和RTKs调控钙离子动员 | 第67-69页 |
| 2. 20E诱导的钙离子动员具有浓度依赖性,而JH Ⅲ没有 | 第69-70页 |
| 3. 20E通过Orai 1和TRP通道增加细胞内快速的钙离子内流 | 第70-72页 |
| 4. 20E通过增强钙离子通道的表达水平来维持细胞内高水平的钙离子 | 第72-75页 |
| 5. 20E诱导细胞凋亡 | 第75-79页 |
| 6. 钙离子水平决定了细胞命运 | 第79-81页 |
| 四、讨论 | 第81-83页 |
| 五、结果 | 第83-85页 |
| 论文创新点总结 | 第85-86页 |
| 后期工作展望 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 在读期间发表论文 | 第96-97页 |
| 附件 | 第97页 |
