| 摘要 | 第7-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1 苏云金芽胞杆菌 | 第14-21页 |
| 1.1 苏云金芽胞杆菌及Bt杀虫蛋白 | 第14-17页 |
| 1.2 Bt杀虫蛋白对半翅目昆虫的活性 | 第17-20页 |
| 1.3 Bt杀虫蛋白对稻飞虱的活性 | 第20页 |
| 1.4 Bt杀虫蛋白对于半翅目昆虫活性较低的原因 | 第20-21页 |
| 2 Bt新基因的发掘方法 | 第21-23页 |
| 2.1 基于PCR扩增的挖掘方法 | 第21-22页 |
| 2.2 直接对Bt蛋白的鉴定 | 第22-23页 |
| 3 高通量测序在Bt研究中的应用 | 第23-24页 |
| 3.1 基于DNA的高通量测序 | 第23-24页 |
| 3.2 基于RNA的高通量测序 | 第24页 |
| 4 本研究的目的与意义 | 第24-26页 |
| 第二章 灰飞虱高效生测体系建立与Bt菌株对灰飞虱的活性筛选 | 第26-38页 |
| 1 材料方法 | 第26-32页 |
| 1.1 供试虫源 | 第26页 |
| 1.2 人工饲料 | 第26-28页 |
| 1.3 供试Bt菌株 | 第28-31页 |
| 1.4 Bt晶体蛋白的提取 | 第31页 |
| 1.5 对蛋白样品的处理 | 第31-32页 |
| 1.6 常用仪器 | 第32页 |
| 1.7 生测方法 | 第32页 |
| 1.8 数据分析 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-35页 |
| 2.1 生测体系的建立与验证 | 第32-33页 |
| 2.2 Bt菌株活性筛选与鉴定 | 第33-35页 |
| 3 小结与讨论 | 第35-38页 |
| 第三章 IPPBIOTSUC1012菌株中活性蛋白的分离及鉴定 | 第38-52页 |
| 1 材料方法 | 第38-43页 |
| 1.1 基因组提取及测序 | 第38-39页 |
| 1.2 IPPBIOTSUC1012菌株蛋白提取 | 第39页 |
| 1.3 SDS-PAGE检测蛋白 | 第39-41页 |
| 1.4 蛋白离子交换 | 第41页 |
| 1.5 蛋白凝胶过滤层析 | 第41-42页 |
| 1.6 蛋白条带二级质谱(LC-MS/MS)鉴定 | 第42页 |
| 1.7 数据处理 | 第42-43页 |
| 2 结果与分析 | 第43-50页 |
| 2.1 基因组测序、组装和注释 | 第43页 |
| 2.2 蛋白提取、分离及杀虫活性鉴定 | 第43-48页 |
| 2.3 蛋白质二级质谱鉴定 | 第48-49页 |
| 2.4 基因及蛋白序列分析 | 第49-50页 |
| 3 小结与讨论 | 第50-52页 |
| 第四章 ST-1和ST-2基因的原核表达及活性研究 | 第52-70页 |
| 1 材料方法 | 第52-59页 |
| 1.1 主要试剂 | 第52-53页 |
| 1.2 PCR | 第53-54页 |
| 1.3 PCR产物回收 | 第54页 |
| 1.4 酶切、连接及转化 | 第54-55页 |
| 1.5 Gateway BP反应 | 第55页 |
| 1.6 质粒提取 | 第55-56页 |
| 1.7 大肠杆菌ET感受态制备 | 第56页 |
| 1.8 Bt感受态制备 | 第56-57页 |
| 1.9 电击转化 | 第57页 |
| 1.10 IPTG诱导表达 | 第57页 |
| 1.11 大肠杆菌包涵体蛋白纯化 | 第57-58页 |
| 1.12 GST标签蛋白纯化 | 第58-59页 |
| 2 结果与分析 | 第59-68页 |
| 2.1 His标签包涵体蛋白纯化及生测 | 第59-61页 |
| 2.2 大肠杆菌中ST-1及ST-2的共表达、纯化及生测 | 第61-63页 |
| 2.3 ST-1及ST-2在Bt HD73~-中表达 | 第63-65页 |
| 2.4 Bt HD73~-表达蛋白的纯化及生测 | 第65-68页 |
| 3 小结与讨论 | 第68-70页 |
| 第五章 基于灰飞虱中肠转录组的Bt受体及相关功能基因分析 | 第70-92页 |
| 1 材料方法 | 第70-79页 |
| 1.1 供试昆虫 | 第70页 |
| 1.2 中肠解剖,RNA提取 | 第70-71页 |
| 1.3 cDNA合成 | 第71页 |
| 1.4 转录组数据处理及生物信息学分析 | 第71-72页 |
| 1.5 转录组数据挖据受体基因实例分析(以RyR基因为例) | 第72-79页 |
| 2 结果与分析 | 第79-90页 |
| 2.1 转录组测序基本信息 | 第79-81页 |
| 2.2 GO分析、COG分析、Pfam分析及感兴趣基因的搜寻 | 第81-85页 |
| 2.3 全虫转录组中RyR片段序列的处理 | 第85页 |
| 2.4 PCR,RACE,及Northern Blot验证 | 第85-87页 |
| 2.5 对RyR基因的序列分析 | 第87-90页 |
| 3 小结与讨论 | 第90-92页 |
| 全文总结 | 第92-94页 |
| 参考文献 | 第94-104页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
