| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第11-22页 |
| 1.1 铜绿假单胞菌简介 | 第11页 |
| 1.2 细菌耐药性 | 第11-14页 |
| 1.2.1 近3年我国细菌耐药性检测 | 第11-12页 |
| 1.2.2 细菌耐药性的成因 | 第12页 |
| 1.2.3 铜绿假单胞菌的耐药机制 | 第12-13页 |
| 1.2.4 耐药基因 | 第13-14页 |
| 1.3 群体感应 | 第14-18页 |
| 1.3.1 群体感应简介 | 第14-15页 |
| 1.3.2 铜绿假单胞菌的群体感应系统 | 第15-16页 |
| 1.3.3 群体感应抑制剂 | 第16-18页 |
| 1.4 中草药 | 第18-19页 |
| 1.4.1 中草药消除耐药质粒 | 第18-19页 |
| 1.4.2 天然产物作为群体感应抑制剂 | 第19页 |
| 1.5 课题选题及研究内容 | 第19-22页 |
| 1.5.1 选题背景及目的 | 第19-20页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第20-21页 |
| 1.5.3 实验流程图 | 第21-22页 |
| 第二章 1040种中草药对耐药菌株抑制作用的筛选及其机理研究 | 第22-35页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 材料与方法 | 第22-27页 |
| 2.2.1 主要仪器及设备 | 第23页 |
| 2.2.2 主要试剂及药品 | 第23-26页 |
| 2.2.3 实验材料 | 第26页 |
| 2.2.4 临床菌株的活化培养 | 第26页 |
| 2.2.5 耐药性检测 | 第26页 |
| 2.2.6 中草药活性成分的提取 | 第26页 |
| 2.2.7 抑菌中草药的筛选 | 第26-27页 |
| 2.2.8 耐药质粒消除 | 第27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-34页 |
| 2.3.1 铜绿假单胞菌的临床来源分布 | 第28页 |
| 2.3.2 临床铜绿假单胞菌的耐药性分析结果 | 第28-30页 |
| 2.3.3 中药抑菌实验结果 | 第30-32页 |
| 2.3.4 耐药质粒消除实验结果 | 第32-34页 |
| 2.4 本章小结 | 第34-35页 |
| 第三章 群体感应抑制剂高通量筛选平台的构建 | 第35-51页 |
| 3.1 引言 | 第35页 |
| 3.2 材料与方法 | 第35-40页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.2.2 主要设备及仪器 | 第36页 |
| 3.2.3 中草药的提取 | 第36页 |
| 3.2.4 HPLC分离条件 | 第36-37页 |
| 3.2.5 Herbochips的制备 | 第37页 |
| 3.2.6 His-LasR蛋白的纯化 | 第37-39页 |
| 3.2.7 LasR多克隆抗体的制备 | 第39页 |
| 3.2.8 LasR蛋白结合活性的筛选 | 第39页 |
| 3.2.9 β-半乳糖苷酶(LacZ)活性实验 | 第39-40页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第40-49页 |
| 3.3.1 筛选平台构建的原理 | 第40-42页 |
| 3.3.2 His-LasR蛋白纯化结果 | 第42页 |
| 3.3.3 中草药HPLC组分与His-LasR结合活性筛选结果 | 第42-48页 |
| 3.3.4 阳性组分对β-半乳糖苷酶(LacZ)活性的影响 | 第48-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-51页 |
| 第四章 五倍子成分分离及鉴定 | 第51-60页 |
| 4.1 引言 | 第51-52页 |
| 4.2 材料与方法 | 第52-53页 |
| 4.2.1 实验材料及仪器 | 第52页 |
| 4.2.2 体外抑菌活性检测 | 第52页 |
| 4.2.3 五倍子活性成分的提取与萃取 | 第52-53页 |
| 4.2.4 乙酸乙酯组分中活性成分的粗分离 | 第53页 |
| 4.2.5 HPLC-MS检测 | 第53页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第53-59页 |
| 4.3.1 各组分萃取物的抑菌活性 | 第53-54页 |
| 4.3.2 乙酸乙酯组分分离结果 | 第54-55页 |
| 4.3.3 8个组分对临床菌株的抑菌效果 | 第55页 |
| 4.3.4 Ye组分加入量对菌株生长的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.5 Ye组分的HPLC-MS检测 | 第56-59页 |
| 4.4 本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 五倍子分离组分对铜绿假单胞菌群体感应及相关基因表达量的影响 | 第60-76页 |
| 5.1 引言 | 第60页 |
| 5.2 材料与方法 | 第60-65页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第60-61页 |
| 5.2.2 实验试剂及药品 | 第61-62页 |
| 5.2.3 实验仪器及设备 | 第62页 |
| 5.2.4 LasR蛋白电泳实验 | 第62-63页 |
| 5.2.5 β-半乳糖苷酶(LacZ)活性实验 | 第63页 |
| 5.2.6 绿脓菌素的提取与检测 | 第63页 |
| 5.2.7 鼠李糖脂的提取与检测 | 第63-64页 |
| 5.2.8 RNA的提取 | 第64页 |
| 5.2.9 cDNA第一链合成和gDNA去除 | 第64页 |
| 5.2.10 荧光定量PCR检测 | 第64-65页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第65-75页 |
| 5.3.1 乙酸乙酯分离组分对LasR蛋白的影响 | 第65-67页 |
| 5.3.2 乙酸乙酯分离组分对β-半乳糖苷酶(LacZ)活性的影响 | 第67-69页 |
| 5.3.3 Ye组分对绿脓菌素产量的影响 | 第69-70页 |
| 5.3.4 Ye组分对鼠李糖脂产量的影响 | 第70-71页 |
| 5.3.5 RNA电泳检测结果 | 第71-72页 |
| 5.3.6 熔解及扩增曲线 | 第72-74页 |
| 5.3.7 Ye对六个基因相对表达量的影响 | 第74-75页 |
| 5.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 第六章 总结与展望 | 第76-78页 |
| 6.1 全文总结 | 第76-77页 |
| 6.2 展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 附录 | 第82-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第88页 |
