| 致谢 | 第1-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-30页 |
| 1. 稻瘟病概述 | 第16-18页 |
| ·稻瘟病及病原菌 | 第16页 |
| ·稻瘟病的发病规律 | 第16-17页 |
| ·稻瘟病菌的侵染过程 | 第17-18页 |
| 2. 稻瘟菌致病相关基因的研究进展 | 第18-23页 |
| ·产孢相关基因 | 第18-19页 |
| ·附着孢发育相关基因 | 第19-23页 |
| ·界面硬度和疏水性影响附着胞的分化 | 第19页 |
| ·分生孢子分泌疏水蛋白识别胞外信号 | 第19-20页 |
| ·细胞质膜跨膜蛋白和胞外信号传递 | 第20-21页 |
| ·附着胞黑色素层的沉积与膨压的形成 | 第21-22页 |
| ·分生孢子特异性内含物与膨压的形成 | 第22-23页 |
| 3. 农杆菌介导的稻瘟病菌T-DNA转化和插入突变研究 | 第23-25页 |
| ·丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第23-24页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA转化研究 | 第24-25页 |
| ·T-DNA插入突变的优势分析 | 第25页 |
| 4. 扩增侧翼序列技术TAIL-PCR(THERMAL ASMMETRIC INTERLACED PCR) | 第25-26页 |
| 5. MTHFR的研究进展 | 第26-28页 |
| ·叶酸与methionine循环 | 第26-27页 |
| ·一碳单位代谢中MTHFR调节作用 | 第27-28页 |
| 6. 本研究的目的意义和技术路线 | 第28-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-45页 |
| 1. 材料 | 第30-34页 |
| ·实验菌株、质粒载体及水稻、大麦致病性测定品种 | 第30-31页 |
| ·实验菌株 | 第30页 |
| ·质粒载体 | 第30-31页 |
| ·水稻、大麦致病性测定品种 | 第31页 |
| ·各类抗生素、培养基及工具酶 | 第31-34页 |
| ·各类抗生素 | 第31-32页 |
| ·培养基 | 第32-34页 |
| ·工具酶 | 第34页 |
| ·各类生化试剂、溶液及试剂盒 | 第34页 |
| 2 稻瘟病菌生物学性状测定试验 | 第34-37页 |
| ·菌落生长速度及菌落特性 | 第35页 |
| ·稻瘟病菌产孢培养和产孢量 | 第35页 |
| ·附着胞形成实验 | 第35-36页 |
| ·稻瘟菌有性生殖实验 | 第36页 |
| ·大麦和水稻离体接种 | 第36页 |
| ·稻瘟病菌菌丝、分生孢子和附着孢的GFP观察 | 第36-37页 |
| 3 PCR扩增 | 第37-38页 |
| ·常规PCR反应体系 | 第37页 |
| ·细菌菌落PCR反应体系 | 第37页 |
| ·高效TAIL-PCR(hiTAIL-PCR)反应体系及反应程序 | 第37-38页 |
| 4. 质粒DNA、基因组DNA及小片段DNA相关操作 | 第38-41页 |
| ·质粒DNA提取(CTAB法) | 第38-39页 |
| ·基因组DNA抽提 | 第39-40页 |
| ·DNA酶切 | 第40页 |
| ·胶回收(Axyprep DNA gel extraction kit回收法) | 第40页 |
| ·酶切DNA片段的去磷酸化 | 第40-41页 |
| ·连接反应 | 第41页 |
| 5. 细菌和真菌转化 | 第41-45页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA转化 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及细菌转化 | 第42-43页 |
| ·稻瘟菌原生质体制备与转化 | 第43-44页 |
| ·酵母转化 | 第44-45页 |
| 第三章 结果与分析 | 第45-67页 |
| 1. 致病缺陷突变体Wh-672的获得 | 第45-47页 |
| ·农杆菌介导的稻瘟菌T-DNA转化 | 第45页 |
| ·转化子致病性筛选和突变体Wh-672的获得 | 第45-46页 |
| ·突变体Wh-672遗传稳定性检测 | 第46-47页 |
| 2. MoMET13基因的分离与同源性分析 | 第47-52页 |
| ·MoMET13基因的分离 | 第47-48页 |
| ·MoMET13基因的克隆、测序 | 第48页 |
| ·MoMET13基因的获得与序列分析 | 第48-51页 |
| ·MoMET13的同源基因 | 第51-52页 |
| 3 MoMET13基因缺失突变 | 第52-55页 |
| ·MoMET13基因缺失载体构建 | 第52-53页 |
| ·MoMET13基因缺失突变体的获得及验证 | 第53-55页 |
| 4 MoMET12基因缺失突变体 | 第55-57页 |
| ·MoMET12基因缺失载体构建 | 第55-56页 |
| ·MoMET12基因缺失突变体的获得及验证 | 第56-57页 |
| 5. 突变体Wh-672性状恢复实验 | 第57-58页 |
| ·互补载体的构建 | 第57-58页 |
| ·互补转化 | 第58页 |
| 6. 酵母互补 | 第58-59页 |
| ·酵母互补载体的构建 | 第58-59页 |
| ·酵母互补转化 | 第59页 |
| 7 突变体生物学性状研究 | 第59-67页 |
| ·菌落形态和生长速度分析 | 第59-60页 |
| ·突变体在MM培养基生长状况 | 第60-62页 |
| ·分生孢子和附着孢形成观察 | 第62-64页 |
| ·有性生殖实验 | 第64-65页 |
| ·致病性分析 | 第65-66页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第66-67页 |
| 第四章 全文总结讨论及后续研究 | 第67-70页 |
| 1. 全文总结讨论 | 第67-68页 |
| 2. 存在的问题和今后的研究 | 第68-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 附表 | 第74页 |
