| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词及符号说明表 | 第8-13页 |
| 1 文献综述 | 第13-18页 |
| 1.1 鸭肝炎病毒简述 | 第13-14页 |
| 1.2 鸭肝炎病毒(DHAV)的检测方法 | 第14-15页 |
| 1.2.1 病毒的分离与鉴定 | 第14页 |
| 1.2.2 血清学检测 | 第14页 |
| 1.2.3 分子生物学技术 | 第14-15页 |
| 1.3 DHAV的增殖方式 | 第15-16页 |
| 1.4 DHAV在雏鸭和成年鸭体内的分布与排泄规律研究概况 | 第16-17页 |
| 1.4.1 DHAV在雏鸭体内的分布与排泄规律 | 第16-17页 |
| 1.4.2 DHAV-1在成年鸭体内的分布与排泄规律 | 第17页 |
| 1.5 选题的目的与意义 | 第17-18页 |
| 2 试验研究 | 第18-30页 |
| 2.1 试验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 毒株及试验动物 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂与耗材 | 第18页 |
| 2.1.3 仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.4 常用试剂的配制 | 第19页 |
| 2.2 DHAV-3 qPCR检测方法建立及在DEF和DELC增殖规律 | 第19-23页 |
| 2.2.1 DNA阳性标准品制备 | 第19-21页 |
| 2.2.2 退火温度优化 | 第21页 |
| 2.2.3 标准曲线 | 第21-22页 |
| 2.2.4 重复性检测 | 第22页 |
| 2.2.5 特异性评价 | 第22页 |
| 2.2.6 灵敏度 | 第22页 |
| 2.2.7 DHAV-3适应鸭胚成纤维细胞(DEF)和鸭胚肝细胞(DELC) | 第22-23页 |
| 2.2.8 DHAV-3在DEF和DELC中的增殖规律 | 第23页 |
| 2.3 检测DHAV-3的荧光定量RT-LAMP方法建立 | 第23-27页 |
| 2.3.1 RNA阳性标准品制备 | 第23-25页 |
| 2.3.2 Real-time RT-LAMP条件优化 | 第25-26页 |
| 2.3.3 标准曲线 | 第26-27页 |
| 2.3.4 酶切验证 | 第27页 |
| 2.3.5 灵敏度确定 | 第27页 |
| 2.3.6 特异性评价 | 第27页 |
| 2.3.7 临床样本的检测 | 第27页 |
| 2.4 DHAV-3在青年鸭体内的分布与排泄规律 | 第27-30页 |
| 2.4.1 DHAV-3 qRT-PCR检测方法 | 第27-28页 |
| 2.4.2 实验鸭接毒 | 第28页 |
| 2.4.3 样品采集与处理 | 第28-29页 |
| 2.4.4 样品抽提RNA | 第29页 |
| 4.4.5 qRT-PCR检测样品 | 第29-30页 |
| 2.4.6 实验数据处理 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-53页 |
| 3.1 DHAV-3 qPCR方法建立及DHAV-3在DEF和DELC增殖规律 | 第30-37页 |
| 3.1.1 DNA阳性标准品制备 | 第30-31页 |
| 3.1.2 退火温度优化 | 第31-32页 |
| 3.1.3 标准曲线 | 第32页 |
| 3.1.4 重复性 | 第32页 |
| 3.1.5 特异性 | 第32-33页 |
| 3.1.6 灵敏度 | 第33页 |
| 3.1.7 DHAV-3适应DEF和DELC | 第33-35页 |
| 3.1.8 DHAV-3在DEF和DELC中的增殖规律 | 第35-37页 |
| 3.2 荧光定量RT-LAMP检测DHAV-3方法建立与应用 | 第37-45页 |
| 3.2.1 RNA阳性标准品制备 | 第37-38页 |
| 3.2.2 Real-time RT-LAMP条件优化 | 第38-41页 |
| 3.2.3 标准曲线 | 第41-42页 |
| 3.2.4 酶切验证 | 第42-43页 |
| 3.2.5 灵敏度 | 第43-44页 |
| 3.2.6 特异性评价 | 第44-45页 |
| 3.2.7 临床样本的检测 | 第45页 |
| 3.3 DHAV-3在青年鸭体内的分布与排泄规律 | 第45-53页 |
| 3.3.1 呼吸器官 | 第45-46页 |
| 3.3.2 免疫器官 | 第46-47页 |
| 3.3.3 消化器官 | 第47-50页 |
| 3.3.4 唾液及消化器官的内容物 | 第50-52页 |
| 3.3.5 肝脏 | 第52页 |
| 3.3.6 其余组织器官 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-63页 |
| 4.1 DHAV-3 qPCR方法建立及在DEF和DELC中增殖规律 | 第53-55页 |
| 4.1.1 DELC培养与DEF培养 | 第53-54页 |
| 4.1.2 qPCR与TCID_(50)检测DHAV-3在DEF和DELC中的增殖规律 | 第54-55页 |
| 4.2 DHAV-3荧光定量RT-LAMP方法建立及临床样本的检测 | 第55-56页 |
| 4.2.1 Real-time RT-LAMP体系 | 第55页 |
| 4.2.2 荧光定量RT-LAMP的比较 | 第55-56页 |
| 4.3 DHAV-3在青年鸭体内的分布与排泄规律 | 第56-60页 |
| 4.3.1 针对DHAV-3建立qRT-PCR检测方法 | 第56页 |
| 4.3.2 DHAV-3在青年鸭体内的分布与排泄规律 | 第56-58页 |
| 4.3.3 DHAV-3在青年鸭和雏鸭体内的增殖、分布与排泄规律的比较 | 第58-59页 |
| 4.3.4 DHAV-3对青年鸭和雏鸭致病性差异的原因 | 第59-60页 |
| 4.4 qPCR、real-time RT-LAMP、qRT-PCR的比较 | 第60-63页 |
| 4.4.1 qPCR、qRT-PCR、real-time RT-LAMP反应原理比较 | 第60-61页 |
| 4.4.2 qPCR、qRT-PCR、real-time RT-LAMP建立与应用的差异 | 第61-63页 |
| 5 小结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-82页 |
