摘要 | 第6-8页 |
ABSTRACT | 第8-9页 |
第一章 文献综述 | 第13-20页 |
1.1 小麦条锈病的发病现状及危害 | 第13-14页 |
1.2 小麦条锈菌的生物学特性 | 第14页 |
1.3 植物病原菌效应蛋白的研究进展 | 第14-17页 |
1.3.1 植物与病原菌互作的Z字模型 | 第14-16页 |
1.3.2 效应基因的序列特征 | 第16页 |
1.3.3 胞外效应蛋白和胞内效应蛋白 | 第16页 |
1.3.4 效应基因的鉴定技术 | 第16-17页 |
1.5 小麦条锈菌转录组分析 | 第17页 |
1.6 miRNA的发现与功能 | 第17-18页 |
1.7 miRNA的鉴定方法 | 第18-19页 |
1.8 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
第二章 小麦条锈菌吸器RNA-Seq序列分析 | 第20-40页 |
前言 | 第20页 |
2.1 材料和方法 | 第20-30页 |
2.1.1 小麦幼苗培养、接种和取样 | 第20页 |
2.1.2 试剂与仪器 | 第20-21页 |
2.1.3 琼脂糖凝胶柱的制备 | 第21页 |
2.1.4 小麦条锈菌吸器的提取 | 第21-22页 |
2.1.5 显微镜观察提取的吸器 | 第22页 |
2.1.6 吸器总RNA提取 | 第22-23页 |
2.1.7 小麦条锈菌吸器总RNA浓度、纯度及完整性检测 | 第23页 |
2.1.8 条锈菌rRNA去除和RNA片断化(rRNA depleted and RNA fragmentation) | 第23-24页 |
2.1.9 mRNA纯化及片段化(Purify the m RNA and Fragmentation) | 第24页 |
2.1.10 cDNA第一链合成 | 第24-25页 |
2.1.11 cDNA第二链合成 | 第25页 |
2.1.12 末端修复(Perform End Repair) | 第25-26页 |
2.1.13 3 '末端加腺苷酸(Adenylate 3' Ends) | 第26页 |
2.1.14 连接接头(Ligate the Adapters) | 第26-27页 |
2.1.15 富集纯化的cDNA模板( Enrich the cDNA Templates) | 第27-28页 |
2.1.16 文库质检(QC the libraries) | 第28页 |
2.1.17 试剂和仪器(Reagent and Equipment) | 第28-29页 |
2.1.18 序列处理与拼接 | 第29页 |
2.1.19 功能注释 | 第29-30页 |
2.2 结果与分析 | 第30-37页 |
2.2.1 小麦条锈菌吸器分离效率与纯度检测 | 第30页 |
2.2.2 RNA浓度、纯度及完整性检测 | 第30-31页 |
2.2.3 测序数据和从头组装( de novo) | 第31-32页 |
2.2.4 序列比对及功能注释 | 第32-34页 |
2.2.5 功能分类 | 第34-35页 |
2.2.6 代谢途径分析 | 第35-37页 |
2.3 讨论 | 第37-38页 |
2.4 小结 | 第38-40页 |
第三章 小麦条锈菌PSTha5a23效应蛋白的筛选及其功能研究 | 第40-55页 |
3.1 材料 | 第40-41页 |
3.2 方法 | 第41-44页 |
3.2.1 生物信息学分析方法 | 第41页 |
3.2.2 抑制子PSTha5a23效应蛋白的筛选 | 第41页 |
3.2.3 PSTha5a23基因质粒构建方法 | 第41-43页 |
3.2.4 PSTha5a23基因的表达特征分析 | 第43页 |
3.2.5 PSTha5a23基因的多态性分析 | 第43页 |
3.2.6 PSTha5a23蛋白的分泌特性验证 | 第43页 |
3.2.7 PSTha5a23基因的亚细胞定位 | 第43页 |
3.2.8 PSTha5a23基因的过表达 | 第43-44页 |
3.2.9 PSTha5a23基因的沉默 | 第44页 |
3.3 结果与分析 | 第44-52页 |
3.3.1 生物信息学分析结果 | 第44页 |
3.3.2 PSTha5a23基因的筛选与鉴定 | 第44-45页 |
3.3.3 PSTha5a23基因的表达特征分析 | 第45-46页 |
3.3.4 PSTha5a23基因的多态性分析 | 第46-47页 |
3.3.5 PSTha5a23蛋白的分泌特性验证 | 第47-48页 |
3.3.6 PSTha5a23基因的亚细胞定位 | 第48-49页 |
3.3.7 PSTha5a23基因的过表达 | 第49-51页 |
3.3.8 PSTha5a23基因的沉默 | 第51-52页 |
3.4 讨论 | 第52-54页 |
3.5 小结 | 第54-55页 |
第四章 结论和创新点 | 第55-57页 |
4.1 结论 | 第55-56页 |
4.1.1 条锈菌CYR32吸器转录组 | 第55页 |
4.1.2 条锈菌CYR32 unigene的GO注释分类 | 第55页 |
4.1.3 条锈菌CYR32 unigene的KEGG数据库的代谢通路( pathway)分析 | 第55页 |
4.1.4 条锈菌CYR32效应因子的预测 | 第55-56页 |
4.1.5 条锈菌PSTha5a23的基因功能 | 第56页 |
4.2 创新点 | 第56-57页 |
参考文献 | 第57-79页 |
附录 | 第79-94页 |
附表 | 第94-104页 |
附件 3 | 第104-107页 |
致谢 | 第107-109页 |
作者简介 | 第109页 |