| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·L-天冬酰胺酶概论 | 第11-15页 |
| ·L-天冬酰胺酶发现历史 | 第11页 |
| ·L-天冬酰胺酶来源 | 第11-12页 |
| ·L-天冬酰胺酶的结构 | 第12-13页 |
| ·L-天冬酰胺酶的生理作用 | 第13-15页 |
| ·L-天冬酰胺酶的研究进展 | 第15-19页 |
| ·L-天冬酰胺酶的修饰和固定化的研究进展 | 第15-16页 |
| ·L-天冬酰胺酶基因工程菌的的研究进展 | 第16-17页 |
| ·L-天冬酰胺酶提取纯化工艺的研究进展 | 第17页 |
| ·L-天冬酰胺酶的发酵工艺的研究进展 | 第17-19页 |
| ·展望 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料、仪器与方法 | 第21-37页 |
| ·实验材料 | 第21-22页 |
| ·实验仪器 | 第22页 |
| ·实验方法 | 第22-37页 |
| ·大肠杆菌L-天冬酰胺酶Ⅱ基因ansB的获得 | 第22-25页 |
| ·大肠杆菌ansB基因的选择 | 第22-23页 |
| ·PCR引物设计 | 第23页 |
| ·大肠杆菌全基因组DNA的提取 | 第23-24页 |
| ·PCR扩增ansB基因 | 第24-25页 |
| ·PCR产物纯化 | 第25页 |
| ·重组克隆质粒的构建 | 第25-27页 |
| ·T-A克隆 | 第25页 |
| ·大肠杆菌Top10感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| ·重组克隆质粒的转化 | 第26页 |
| ·阳性克隆载体的筛选与鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第27-31页 |
| ·重组克隆载体质粒和表达载体质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·重组克隆载体和表达载体的分别双酶切反应 | 第28页 |
| ·酶切片段的胶回收 | 第28-29页 |
| ·构建表达载体pET-22b-ansB | 第29页 |
| ·大肠杆菌BL21感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·表达载体pET-22b-ansB的转化 | 第29-30页 |
| ·阳性表达载体pET-22b-ansB的筛选与鉴定 | 第30-31页 |
| ·AnsB蛋白的诱导表达与纯化 | 第31-35页 |
| ·IPTG诱导重组蛋白AnsB的表达 | 第31页 |
| ·超声波破碎大肠杆菌细胞 | 第31-32页 |
| ·AnsB蛋白的亲和层析 | 第32页 |
| ·AnsB蛋白浓缩除盐 | 第32-33页 |
| ·SDS-PAGE定性分析AnsB蛋白 | 第33-34页 |
| ·AnsB蛋白的浓度测定 | 第34-35页 |
| ·L-天冬酰胺酶活力的测定 | 第35-37页 |
| ·酶活测定方法 | 第35页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶粗酶液的酶活测定 | 第35页 |
| ·亲和纯化后的L-天冬酰胺酶活性测定 | 第35页 |
| ·大肠杆菌的本底表达的L-天冬酰胺酶活性测定 | 第35-37页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第37-47页 |
| ·大肠杆菌L-天冬酰胺酶Ⅱ基因ansB的获得 | 第37-39页 |
| ·大肠杆菌AS1.357总DNA的提取 | 第37页 |
| ·PCR扩增L-天冬酰胺酶Ⅱ基因ansB | 第37-38页 |
| ·目的基因ansBPCR产物纯化 | 第38-39页 |
| ·重组克隆载体pMD18-T-ansB的构建和鉴定 | 第39-40页 |
| ·重组表达载体pET-22b-ansB的构建和鉴定 | 第40-43页 |
| ·表达载体pET-22b的双酶切鉴定 | 第40页 |
| ·重组质粒pET-22b-ansB的表达与鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组表达质粒pET-22b-ansB测序鉴定 | 第41-43页 |
| ·SDS-PAGE定性分析AnsB蛋白 | 第43页 |
| ·AnsB蛋白的浓度测定 | 第43-44页 |
| ·重组L-天冬酰胺酶酶活测定 | 第44-47页 |
| ·氨氮标准曲线的绘制 | 第44-45页 |
| ·L-天冬酰胺酶活性测定 | 第45-47页 |
| 第四章 结论与展望 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 致谢 | 第55-57页 |
| 附录 | 第57页 |
