9型腺相关病毒导R65核酶基因靶向转导干预动脉粥样硬化的研究

【摘要】：目的：以重组9型腺相关病毒(recombinant adeno-associated virus serotype 9,rAAV9)为载体介导R65核酶基因转导ApoE-/-小鼠,观察是否能抑制主动脉NF-κB信号通路表达,进而减轻炎症反应,防治动脉粥样硬化的发生。方法：(1)8周龄ApoE-/-小鼠分别给予高脂饮食和普通饮食8,12,16,20,24周后,检测血脂表达情况,油红O染色观察斑块面积表达,Western blot检测高脂饮食组主动脉中NF-κB信号通路P65和P50的表达。(2)8周龄ApoE-/-小鼠高脂饮食喂养16周后,于14,21,28,35,60天留取主动脉组织,激光共聚焦显微镜和Western blot检测主动脉中eGFP的表达。(3)8周龄ApoE-/-小鼠尾静脉分别注射rAAV9-eGFP和rAAV9-eGFP-R65,同时给予高脂饮食,16周后测定血脂水平,大体油红O染色检测斑块面积表达,Western blot检测NF-κB信号通路P65和P50的表达,ELISA检测炎症因子TNF-α和IL-6的表达。结果：(1)血脂检测结果显示高脂饮食组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平显著高于普通饮食组,油红O染色结果显示高脂饮食组形成斑块病变比普通饮食组更快,并可有效激活NF-κB信号通路。(2)激光共聚焦显微镜和Western blot结果显示rAAV9-eGFP可有效转染主动脉血管,eGFP的表达高峰在第35天。(3)血清学和油红O染色结果显示转导rAAV9-eGFP-R65可减轻血脂水平和斑块表达。Western blot结果显示采用高脂饮食16周后可有效激活NF-κB信号通路,且转染rAAV9-eGFP-R65后可抑制NF-κB信号通路的活性。ELISA结果显示,rAAV9-eGFP-R65转染后可有效减轻炎症因子TNF-α和IL-6表达。结论：高脂饮食可以加快动脉粥样硬化的病理进程,并有效激活NF-κB信号通路,16周时可形成稳定的动脉粥样硬化模型。rAAV9-eGFP可有效、持久、稳定的转染于动脉粥样硬化小鼠主动脉中。rAAV9-eGFP-R65可减轻主动脉中NF-κB信号通路的表达活性,有效减轻动脉粥样硬化病程进展。
【关键词】：9型腺相关病毒 NF-κB信号通路 ApoE~(-/-)小鼠 动脉粥样硬化
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R543.5