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CO和H2S调控碳、硫代谢促进三萜积累的初步研究

摘要第1-6页
Abstract第6-12页
1 绪论第12-18页
   ·次生代谢产物研究概况第12页
   ·白桦和桑黄研究概况第12-13页
     ·白桦的研究概况第12页
     ·桑黄的研究概况第12-13页
   ·三萜的研究概况及应用前景第13-15页
     ·三萜的研究概况及合成途径第13-14页
     ·三萜化合物应用前景第14-15页
   ·气体信号分子研究进展第15-17页
     ·气体信号分子第15-16页
     ·气体信号分子互作研究第16-17页
   ·本研究的目的意义第17-18页
2 材料方法第18-27页
   ·材料培养第18页
     ·白桦悬浮细胞的培养第18页
     ·桑黄菌丝体的液体培养第18页
   ·一氧化碳及硫化氢的添加第18-19页
     ·外源一氧化碳及硫化氢清除剂亚牛磺酸(HT)的添加第18-19页
     ·外源硫化氢及一氧化碳清除剂血红蛋白(Hb)的添加第19页
     ·蔗糖、果糖和葡萄糖的添加第19页
   ·生理活性及抗氧化酶活性的测定第19-21页
     ·pH值及电导率的测定第19页
     ·丙二醛浓度及超氧化物阴离子产生速率的测定第19-20页
     ·可溶性蛋白及过氧化氢含量的测定第20页
     ·防御酶活性的测定第20-21页
   ·三萜的提取及含量的测定第21页
   ·白桦脂醇的提取及含量的测定第21页
   ·实时荧光定量PCR检测三萜关键合成酶基因的表达第21-22页
     ·RNA的提取及浓度测定第21-22页
     ·cDNA的合成第22页
     ·实时荧光定量PCR第22页
   ·硫化氢(H_2S)含量及合成酶活性的测定第22-23页
     ·硫化氢(H_2S)含量的测定第22-23页
     ·半胱氨酸脱巯基酶(LCD及DCD)活性的测定第23页
   ·一氧化碳(CO)含量及合成酶活性的测定第23页
     ·一氧化碳(CO)含量的测定第23页
     ·血红素加氧酶(HO-1)活性的测定第23页
   ·一氧化碳及硫化氢对硫代谢的影响第23-25页
     ·S-亚硝基硫醇的提取及含量的测定第23-24页
     ·谷胱甘肽含量的测定第24页
     ·总硫的提取及含量的测定第24-25页
   ·一氧化碳及硫化氢对碳代谢的调控第25-26页
     ·蔗糖、果糖、葡萄糖的提取及含量的测定第25页
     ·蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶活性的测定第25-26页
     ·丙酮酸的提取及含量的测定第26页
   ·统计分析第26-27页
3 结果与分析第27-77页
   ·CO处理对白桦悬浮细胞三萜积累的影响第27-35页
     ·CO处理对白桦悬浮细胞培养液pH值的影响第27页
     ·CO处理对白桦悬浮细胞培养液电导率的影响第27-28页
     ·CO处理对白桦悬浮细胞丙二醛含量的影响第28-29页
     ·CO处理对白桦悬浮细胞防御酶活性的影响第29-31页
     ·CO处理对白桦悬浮细胞干重的影响第31页
     ·CO处理对白桦悬浮细胞三萜积累的影响第31-32页
     ·CO处理对白桦悬浮细胞白桦脂醇积累的影响第32-33页
     ·CO处理对白桦悬浮细胞齐墩果酸积累的影响第33-34页
     ·CO处理对白桦三萜合成关键酶基因表达水平的影响第34-35页
   ·CO处理对桑黄菌丝三萜积累的影响第35-43页
     ·CO处理对桑黄菌丝液体培养液pH值的影响第35-36页
     ·CO处理对桑黄菌丝液体培养液电导率的影响第36-37页
     ·CO处理对桑黄菌丝可溶性蛋白含量的影响第37-38页
     ·CO处理对桑黄菌丝过氧化氢含量的影响第38页
     ·CO处理对桑黄菌丝超氧阴离子含量的影响第38-39页
     ·CO处理对桑黄菌丝SOD活性的影响第39-40页
     ·CO处理对桑黄菌丝POD活性的影响第40-41页
     ·CO处理对桑黄菌丝CAT活性的影响第41页
     ·CO处理对桑黄菌丝干重的影响第41-42页
     ·CO处理对桑黄菌丝三萜积累的影响第42-43页
     ·CO处理对桑黄菌丝白桦脂醇积累的影响第43页
   ·H_2S处理对桑黄菌丝三萜积累的影响第43-49页
     ·H_2S处理对桑黄菌丝可溶性蛋白含量的影响第43-44页
     ·H_2S处理对桑黄菌丝超氧阴离子含量的影响第44-45页
     ·H_2S处理对桑黄菌丝过氧化氢含量的影响第45-46页
     ·H_2S处理对桑黄菌丝SOD活性的影响第46页
     ·H_2S处理对桑黄菌丝POD活性的影响第46-47页
     ·H_2S处理对桑黄菌丝CAT活性的影响第47-48页
     ·H_2S处理对桑黄菌丝三萜积累的影响第48页
     ·H_2S处理对桑黄菌丝白桦脂醇积累的影响第48-49页
   ·H_2S介导CO促进桑黄菌丝三萜积累的研究第49-53页
     ·CO处理对桑黄菌丝内源H_2S含量的影响第49-50页
     ·CO处理对桑黄菌丝H_2S合成关键酶活性的影响第50-52页
     ·CO及硫化氢清除剂处理对桑黄菌丝三萜积累的影响第52-53页
   ·CO介导H_2S促进桑黄菌丝三萜积累的研究第53-58页
     ·H_2S处理对桑黄菌丝内源CO含量的影响第53-54页
     ·H_2S处理对桑黄菌丝CO合成关键酶活性的影响第54-55页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝血红素加氧酶基因表达水平的影响第55-57页
     ·H_2S及一氧化碳清除剂处理对桑黄菌丝三萜积累的影响第57-58页
   ·CO和H_2S对桑黄菌丝碳代谢的调控第58-67页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝葡萄糖含量的影响第58-59页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝果糖含量的影响第59-60页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝蔗糖含量的影响第60-61页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝蔗糖合成酶活性的影响第61-62页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝蔗糖磷酸合成酶活性的影响第62-64页
     ·CO和H_2S处理与可溶性糖互作对桑黄菌丝三萜积累的影响第64-67页
   ·CO和H_2S对桑黄菌丝硫代谢的调控第67-77页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝S-亚硝基硫醇含量的影响第67-68页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝总硫含量的影响第68-70页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝谷胱甘肽含量的影响第70-72页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝谷胱甘肽还原酶基因表达水平的影响第72-74页
     ·CO和H_2S处理对桑黄菌丝丙酮酸含量的影响第74-77页
4 讨论第77-81页
结论第81-82页
参考文献第82-87页
附录 血红素加氧酶及谷胱甘肽还原酶基因克隆 #76第87-90页
 1 材料与方法第87-89页
   ·材料及仪器第87页
   ·试验方法第87-89页
 2. 结果分析第89-90页
   ·目的基因PCR扩增电泳图第89页
   ·菌PCR液验证T载体阳性克隆第89-90页
攻读学位期间发表的学术论文第90-91页
致谢第91-92页

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