| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-12页 |
| 前言 | 第12-24页 |
| 1. VEGF简介 | 第12-16页 |
| ·VEGF的结构和功能 | 第12-14页 |
| ·VEGF与疾病 | 第14页 |
| ·通过抑制VEGF功能进行疾病治疗的研究现状 | 第14-16页 |
| 2.EGFR简介 | 第16-20页 |
| ·EGFR的结构和功能 | 第16-18页 |
| ·EGFR与癌症 | 第18页 |
| ·通过抑制EGFR功能进行癌症治疗的研究现状 | 第18-20页 |
| 3 单域抗体简介 | 第20-22页 |
| 4 采用噬菌体展示技术筛选抗体 | 第22-23页 |
| 5 本课题的研究意义 | 第23-24页 |
| 主要技术路线简图 | 第24-25页 |
| 实验仪器和材料 | 第25-37页 |
| 1 主要实验仪器 | 第25-26页 |
| 2 主要实验材料 | 第26-37页 |
| ·细菌及质粒 | 第26页 |
| ·试剂盒、工具酶及耗材 | 第26-27页 |
| ·培养基及试剂 | 第27-28页 |
| ·主要试剂配方 | 第28-36页 |
| ·PCR引物信息 | 第36-37页 |
| 第一部分 筛选和分析抗VEGF的人重链单域抗体（hdAb） | 第37-72页 |
| 第一章 实验方法 | 第37-55页 |
| 1 VEGF片段的表达、纯化和复性 | 第37-41页 |
| ·合成VEGF DNA片段并连接至pET-22b质粒 | 第37页 |
| ·摸索VEGF片段表达条件 | 第37-38页 |
| ·表达和纯化VEGF片段 | 第38-39页 |
| ·对纯化的VEGF片段进行复性 | 第39-41页 |
| 2 从文库中富集抗VEGF片段的hd Ab噬菌体 | 第41-45页 |
| ·hdAb文库扩增 | 第41-43页 |
| ·采用噬菌体展示从文库中富集抗VEGF片段的噬菌体 | 第43-45页 |
| ·采用多克隆噬菌体ELISA检测5轮筛选的富集程度 | 第45页 |
| 3 筛选抗VEGF的噬菌体单克隆 | 第45-47页 |
| ·采用噬菌体ELISA筛选抗VEGF片段的噬菌体单克隆 | 第45-46页 |
| ·采用多个无关抗原对筛选所得阳性噬菌体克隆进行ELISA验证 | 第46-47页 |
| 4 阳性噬菌体克隆DNA测序分析 | 第47-48页 |
| ·抽提所有阳性克隆噬菌粒 | 第47-48页 |
| ·hdAb阳性噬菌体克隆DNA测序及分析 | 第48页 |
| 5 表达和纯化阳性抗VEGF片段的hdAb | 第48-53页 |
| ·PCR扩增阳性噬菌体hd Ab片段 | 第48-50页 |
| ·将hd Ab DNA连接到表达载体pET-22b中 | 第50-52页 |
| ·阳性hd Ab表达条件摸索及Western blotting鉴定 | 第52-53页 |
| ·纯化4个可溶性表达的hd Ab | 第53页 |
| 6 验证纯化的4个hd Ab与VEGF之间的结合 | 第53-54页 |
| ·采用ELISA检测纯化的4个hd Ab与VEGF之间的结合 | 第53-54页 |
| ·Western blotting检测aVE207与VEGF之间的结合 | 第54页 |
| 7 采用非竞争性ELISA检测aVE207与VEGF之间的亲和力 | 第54-55页 |
| 第二章 实验结果 | 第55-69页 |
| 1 VEGF片段表达纯化和复性 | 第55-57页 |
| ·pET-VEGF质粒构建 | 第55页 |
| ·优化VEGF片段表达条件 | 第55-56页 |
| ·VEGF片段的表达和纯化 | 第56-57页 |
| ·VEGF片段的复性 | 第57页 |
| 2 噬菌体展示富集抗VEGF的hd Ab噬菌体 | 第57-59页 |
| ·hdAb文库扩增 | 第57-58页 |
| ·采用噬菌体展示从文库中富集抗VEGF的hd Ab噬菌体 | 第58页 |
| ·采用多克隆噬菌体ELISA检测5轮筛选的富集程度 | 第58-59页 |
| 3 筛选抗VEGF的hdAb噬菌体单克隆 | 第59-61页 |
| ·采用单克隆噬菌体ELISA筛选抗VEGF的hd Ab噬菌体克隆 | 第59-60页 |
| ·采用多个无关抗原验证筛选得到的hd Ab噬菌体克隆的特异性 | 第60-61页 |
| 4 测序、比对和分析hd Ab噬菌体克隆 | 第61页 |
| 5 4个抗VEGF的hdAb的表达和纯化 | 第61-67页 |
| ·PCR扩增4个噬菌体hd Ab片段 | 第61-62页 |
| ·将4个hd Ab连接到表达载体pET-22b中 | 第62页 |
| ·hdAb表达条件的摸索及Western blotting鉴定 | 第62-65页 |
| ·纯化可溶性表达的4个抗VEGF的hd Ab | 第65-67页 |
| 6 检测4个纯化的hd Ab与VEGF之间的结合 | 第67页 |
| 7 采用非竞争性ELISA检测aVE207与VEGF之间的亲和力 | 第67-69页 |
| 第三章 讨论 | 第69-72页 |
| 第二部分 筛选和分析抗EGFR的人重链单域抗体（hd Ab） | 第72-86页 |
| 第一章 实验方法 | 第72-75页 |
| 1 EGFR抗原片段合成 | 第72页 |
| 2 从文库中富集抗EGFR多肽的hd Ab噬菌体 | 第72页 |
| ·采用噬菌体展示从文库中筛选抗EGFR的噬菌体 | 第72页 |
| ·采用多克隆噬菌体ELISA检测5轮筛选的富集程度 | 第72页 |
| 3 筛选抗EGFR的噬菌体单克隆 | 第72-73页 |
| ·采用噬菌体ELISA筛选抗EGFR的噬菌体克隆 | 第72页 |
| ·采用多个无关抗原对筛选所得阳性噬菌体单克隆进行ELISA验证 | 第72-73页 |
| 4 阳性噬菌体克隆DNA测序分析 | 第73页 |
| 5 表达和纯化抗EGFR的hd Ab | 第73页 |
| ·PCR扩增阳性噬菌体hd Ab片段 | 第73页 |
| ·将5个hd Ab连接到表达载体pET-22b中 | 第73页 |
| ·纯化5个可溶性表达的hd Ab | 第73页 |
| 6. 采用ELISA检测纯化的5个hd Ab与EGFR之间的结合 | 第73-74页 |
| 7. 采用非竞争性ELISA检测aEG3C6和aEG4C6与EGFR之间的亲和力 | 第74-75页 |
| 第二章 实验结果 | 第75-84页 |
| 1 EGFR抗原片段合成 | 第75-76页 |
| 2 富集抗EGFR的hd Ab噬菌体并验证特异性 | 第76-77页 |
| ·采用噬菌体展示从文库中富集抗EGFR的hd Ab噬菌体 | 第76页 |
| ·采用多克隆噬菌体ELISA检测5轮筛选的富集程度 | 第76-77页 |
| 3 筛选抗EGFR阳性hd Ab噬菌体单克隆 | 第77-79页 |
| ·采用单克隆噬菌体ELISA筛选抗EGFR的阳性hd Ab噬菌体单克隆 | 第77-78页 |
| ·采用多个无关抗原验证筛选所得阳性hd Ab噬菌体克隆特异性 | 第78-79页 |
| 4 阳性噬菌体克隆DNA测序、比对及分析 | 第79页 |
| 5 阳性抗EGFR的hd Ab表达和纯化 | 第79-81页 |
| ·PCR扩增阳性噬菌体hd Ab片段 | 第79-80页 |
| ·阳性hd Ab连接至表达载体pET-22b | 第80页 |
| ·纯化可溶性表达的5个抗EGFR的hd Ab | 第80-81页 |
| 6. 采用ELISA检测纯化的5个hd Ab与EGFR之间的结合 | 第81-82页 |
| 7. 采用非竞争性ELISA检测aEG3C6和aEG4C6与EGFR之间的亲和力 | 第82-84页 |
| 第三章 讨论 | 第84-86页 |
| 结论与展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-99页 |
| 附录 | 第99-101页 |
| 缩写词中英文对照 | 第101-102页 |
| 在学期间发表论文 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
