| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 缩略 词 | 第8-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-18页 |
| ·副猪嗜血杆菌简述 | 第12-14页 |
| ·病原学 | 第12页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·HPS毒力因子的研究 | 第13-14页 |
| ·阳离子抗菌肽与sapA基因 | 第14-16页 |
| ·抗菌肽的来源与结构 | 第14-15页 |
| ·CAMPs的作用机制 | 第15页 |
| ·细菌抵御CAMPs杀灭作用的机制 | 第15-16页 |
| ·抗菌肽敏感（Sensitive of anti-microbial peptide, sap）基因 | 第16页 |
| ·研究目的与意义 | 第16-18页 |
| 第二章 HPS sapA基因的克隆与分析 | 第18-31页 |
| ·前言 | 第18页 |
| ·材料与方法 | 第18-23页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·菌种 | 第18页 |
| ·试剂和材料 | 第18-19页 |
| ·仪器与设备 | 第19页 |
| ·方法 | 第19-23页 |
| ·副猪嗜血杆菌sapA基因的克隆 | 第19-20页 |
| ·pGEM-sapA克隆载体的构建 | 第20-22页 |
| ·副猪嗜血杆菌sapA基因的序列测定与分析 | 第22页 |
| ·副猪嗜血杆菌sapA基因的分布与同源性分析 | 第22-23页 |
| ·结果与分析 | 第23-29页 |
| ·H31 Sap A基因克隆结果 | 第23页 |
| ·PCR产物回收结果 | 第23-24页 |
| ·重组克隆载体 31A-T的PCR鉴定结果 | 第24页 |
| ·重组克隆载体 31A-T的双酶切鉴定结果 | 第24-25页 |
| ·副猪嗜血杆菌H31菌株sapA基因的测序与分析 | 第25-26页 |
| ·副猪嗜血杆菌不同菌株sapA基因的分布 | 第26页 |
| ·副猪嗜血杆菌不同菌株sapA基因的测序与分析 | 第26-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| ·sapA基因的克隆与预测分析 | 第29页 |
| ·sapA在不同菌株中分布情况 | 第29-30页 |
| ·sapA在不同菌株中同源性分析 | 第30-31页 |
| 第三章 HPS sapA基因的原核表达、纯化 | 第31-46页 |
| ·前言 | 第31页 |
| ·材料与方法 | 第31-38页 |
| ·材料 | 第31-32页 |
| ·菌种与载体 | 第31页 |
| ·试剂与材料 | 第31-32页 |
| ·方法 | 第32-38页 |
| ·试剂的配制 | 第32页 |
| ·sapA基因片段的克隆与纯化 | 第32页 |
| ·原核表达载体pET32a（sapA）的构建 | 第32-34页 |
| ·HPS sapA基因的原核表达 | 第34-36页 |
| ·融合蛋白的大量表达与纯化 | 第36-37页 |
| ·包涵体纯化蛋白的复性与浓缩 | 第37页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-44页 |
| ·pET-32a（sapA）原核表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·pET-32a（sapA）的PCR鉴定与双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·pET-32a（sapA）转化进入受体菌E.coli BL21(DE3)的PCR鉴定 | 第39-40页 |
| ·sapA蛋白的诱导表达 | 第40-44页 |
| ·诱导温度对sapA蛋白表达的影响 | 第40页 |
| ·IPTG浓度对sapA蛋白表达的影响 | 第40-41页 |
| ·诱导时间对sapA蛋白表达的影响 | 第41-42页 |
| ·融合表达蛋白的可溶性分析 | 第42页 |
| ·融合表达蛋白的纯化 | 第42-43页 |
| ·sapA蛋白浓度测定 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 HPS sapA融合表达蛋白的生物学特性研究 | 第46-65页 |
| ·前言 | 第46页 |
| ·材料与方法 | 第46-53页 |
| ·材料试剂与实验动物 | 第46页 |
| ·方法 | 第46-53页 |
| ·试剂的配置 | 第46-47页 |
| ·高免血清的制备 | 第47-48页 |
| ·间接ELISA检测sapA蛋白抗体方法的建立 | 第48-50页 |
| ·sapA蛋白的细菌亚细胞定位 | 第50-52页 |
| ·sapA蛋白高免血清杀菌试验 | 第52页 |
| ·sapA蛋白阻断抗菌肽杀菌试验 | 第52-53页 |
| ·sapA蛋白的动物免疫攻毒试验 | 第53页 |
| ·结果与分析 | 第53-62页 |
| ·间接ELISA检测sapA蛋白抗体方法的建立 | 第53-56页 |
| ·最佳抗原包被浓度、最佳血清稀释度 | 第53-54页 |
| ·酶标二抗最佳使用浓度 | 第54页 |
| ·阴阳性临界值 | 第54-55页 |
| ·血清抗体水平监测 | 第55-56页 |
| ·sapA蛋白的免疫原性鉴定 | 第56-57页 |
| ·ELISA分析sapA蛋白的免疫原性 | 第56页 |
| ·western blot分析sapA蛋白的免疫原性 | 第56-57页 |
| ·sapA蛋白的亚细胞定位 | 第57-59页 |
| ·间接免疫荧光定位细菌表面 | 第57-58页 |
| ·western blot定位细菌亚细胞结构 | 第58-59页 |
| ·sapA蛋白高免血清杀菌试验 | 第59-60页 |
| ·sapA蛋白阻断抗菌肽杀菌试验 | 第60页 |
| ·sapA蛋白的动物免疫攻毒试验 | 第60-62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| ·间接ELISA检测血清sapA蛋白抗体方法的建立 | 第62页 |
| ·sapA融合蛋白的免疫原性 | 第62页 |
| ·sapA蛋白在副猪嗜血杆菌的亚细胞定位 | 第62-63页 |
| ·sapA蛋白高免血清的体外杀菌效应 | 第63页 |
| ·sapA蛋白阻断抗菌肽杀菌效应 | 第63-64页 |
| ·豚鼠免疫攻毒试验 | 第64-65页 |
| 全文总结 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第70-71页 |
| 答辩委员会对论文的评定意见 | 第71-72页 |
