| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 综述 | 第10-35页 |
| 1 转基因家蚕的研究 | 第10-23页 |
| ·家蚕转基因载体系统的构建与发展 | 第11-18页 |
| ·外源基因导入家蚕方法 | 第18-20页 |
| ·利用家蚕生产蜘蛛丝蛋白 | 第20-23页 |
| 2 基因组编辑技术的发展及现状 | 第23-27页 |
| 参考文献 | 第27-35页 |
| 第二章 研究目的与研究内容 | 第35-37页 |
| 1 研究目的与意义 | 第35-36页 |
| 2 研究内容与技术路线 | 第36-37页 |
| ·主要研究内容 | 第36页 |
| ·研究技术路线 | 第36-37页 |
| 第三章 常用实验材料与方法 | 第37-44页 |
| 1 常用仪器 | 第37-38页 |
| 2. 常用的实验方法 | 第38-44页 |
| ·DNA的连接反应体系 | 第38页 |
| ·连接产物的转化 | 第38-39页 |
| ·小剂量抽取质粒DNA的方法(QIAGEN Mini-preps) | 第39页 |
| ·质粒DNA的中量提取 | 第39-40页 |
| ·DNA的酶切反应体系 | 第40页 |
| ·家蚕基因组DNA提取 | 第40-41页 |
| ·目的片段的分离和回收 | 第41页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第41页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第41-42页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第42页 |
| ·细胞的培养和保存 | 第42-43页 |
| ·BmN细胞基因组的抽提方法 | 第43-44页 |
| 第四章TALENs质粒的构建及其效率在细胞中的检测 | 第44-64页 |
| 摘要 | 第44页 |
| 1 引言 | 第44-47页 |
| 2. 材料与方法 | 第47-56页 |
| ·TALENs的设计 | 第47页 |
| ·TALENs的构建 | 第47-50页 |
| ·将构建好的pTAL3- TALEN(9-10) 载体改造为pIE-TALEN(9-10) 载体 | 第50-51页 |
| ·SURVEYOR核酸酶检测TALEN(9-10)在BmN细胞中的作用效率 | 第51-53页 |
| ·Lac Z中断法检测TALEN (9-10) 在BmN细胞中的切割特异性 | 第53-56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-62页 |
| ·pTAL3-TALEN(9-10)质粒的鉴定 | 第56-58页 |
| ·pIE-TALEN(9-10) 载体的构建 | 第58-59页 |
| ·SURVEYOR核酸酶检测pIE-TALEN (9-10)剪切效率 | 第59页 |
| ·lacZ中断法检测p IE-TALEN(9-10)切割特异性 | 第59-62页 |
| 4 讨论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-64页 |
| 第五章 转蜘蛛丝蛋白基因的供体质粒pXL-NTD-eGFP-Spider-CTD的构建 | 第64-72页 |
| 摘要 | 第64页 |
| 1 引言 | 第64-65页 |
| 2 材料与方法 | 第65-69页 |
| ·pXL-BACII-MCS的构建 | 第66-68页 |
| ·蚕丝重链C-段(CTD)的装配 | 第68页 |
| ·蜘蛛丝基因Spider[A2S8]28的装配 | 第68-69页 |
| ·重链蛋白的N-端部分(NTD)和eGFP的装配 | 第69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-71页 |
| ·pXL-BACII-MCS的鉴定 | 第69页 |
| ·pXL-BACII-CTD的鉴定 | 第69-70页 |
| ·Spider[A2S8]28的装配及pIEx1Spider的鉴定 | 第70-71页 |
| ·pXL-NTD-eGFP-Spider-CTD的鉴定 | 第71页 |
| 参考文献 | 第71-72页 |
| 第六章 转基因家蚕的制作、筛选与鉴定 | 第72-87页 |
| 摘要 | 第72页 |
| 1 引言 | 第72-73页 |
| 2 材料与方法 | 第73-78页 |
| ·真空电穿孔法将质粒导入初产卵 | 第73-74页 |
| ·电穿孔处理蚕卵的检测 | 第74页 |
| ·定性检测转基因蚕茧及蚕茧蛋白 | 第74-76页 |
| ·ELISA定量检测蛛丝蛋白的水平 | 第76页 |
| ·转基因家蚕的鉴定 | 第76-77页 |
| ·反向PCR检测外源基因在家蚕基因组中的定位 | 第77-78页 |
| 3 结果与分析 | 第78-84页 |
| ·电穿孔处理家蚕蚕卵的荧光观察与PCR检测 | 第78-79页 |
| ·G0 代转基因蚕茧的荧光观察与表达产物检测 | 第79-84页 |
| 4 讨论 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-87页 |
| 第七章 转基因家蚕蚕丝机械性能的检测 | 第87-97页 |
| 摘要 | 第87页 |
| 1 引言 | 第87-88页 |
| 2. 材料与方法 | 第88-90页 |
| ·蚕丝机械性能的测试具体方法 | 第88-89页 |
| ·数据分析 | 第89-90页 |
| 3. 结果与分析 | 第90-94页 |
| ·转基因蚕丝的最大极限拉力和最大弹性应力 | 第90-91页 |
| ·转基因蚕丝A-D组机械性能指标对比 | 第91-94页 |
| 4 讨论 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-97页 |
| 第八章 G1 代转基因家蚕丝的机械性能研究 | 第97-112页 |
| 摘要 | 第97页 |
| 1 引言 | 第97-98页 |
| 2 材料与方法 | 第98-99页 |
| ·转基因家蚕蚕茧的传代、分组及转基因蚕丝蛋白中eGFP含量的检测 | 第98-99页 |
| ·茧丝的机械性能的测定方法 | 第99页 |
| 3 结果与分析 | 第99-110页 |
| ·G1 代转基因家蚕茧丝蛋白中eGFP含量的测定 | 第99-100页 |
| ·转基因茧丝的机械性能 | 第100-110页 |
| 4 讨论 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-112页 |
| 结论与创新点 | 第112-113页 |
| 资助项目 | 第113-114页 |
| 附录 | 第114-147页 |
| 附件一TALENs (9-10)的相关DNA序列 | 第114-116页 |
| 附录二pTAL3 载体DNA序列 | 第116-118页 |
| 附件三pBR322-lac Z载体的DNA序列 | 第118-120页 |
| 附件四TALENs (9-10)在靶定位点作用效率检测相关测序结果 | 第120-124页 |
| 附件五pXL-BACⅡ-NTD-eGFP-Spider[A2S8]28-NTD载体序列 | 第124-128页 |
| 附件六Piggybac染色体定位DNA序列测序结果 | 第128-140页 |
| 附件七G1 中的转基因家蚕茧丝机械性能数据汇总 | 第140-147页 |
| 致谢 | 第147-14页 |
