| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 第1章 前言 | 第12-21页 |
| ·透明质酸酶 | 第12-17页 |
| ·透明质酸酶概述 | 第12页 |
| ·透明质酸酶的分类 | 第12-14页 |
| ·细菌透明质酸酶的研究进展 | 第14页 |
| ·细菌透明质酸酶的生理结构特点 | 第14-15页 |
| ·透明质酸酶的酶活检测方法 | 第15-16页 |
| ·透明质酸酶的应用 | 第16-17页 |
| ·辅助药物 | 第16页 |
| ·癌症治疗 | 第16页 |
| ·临床手术 | 第16页 |
| ·受精作用 | 第16-17页 |
| ·HA制备 | 第17页 |
| ·透明质酸 | 第17-18页 |
| ·透明质酸概述 | 第17页 |
| ·中低分子量透明质酸的制备 | 第17-18页 |
| ·物理学法 | 第17-18页 |
| ·化学法 | 第18页 |
| ·酶解法 | 第18页 |
| ·透明质酸的应用 | 第18页 |
| ·在食品工业的应用 | 第18页 |
| ·在化妆品工业的应用 | 第18页 |
| ·在医药工业的应用 | 第18页 |
| ·细菌细胞表面表达技术 | 第18-20页 |
| ·细菌细胞表面展示技术概述 | 第19页 |
| ·冰晶核蛋白研究进展 | 第19-20页 |
| ·冰晶核蛋白的结构和功能 | 第20页 |
| ·冰晶核蛋白的细胞表面展示 | 第20页 |
| ·本课题的研究意义 | 第20-21页 |
| 第2章 材料与方法 | 第21-31页 |
| ·实验材料 | 第21-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第21-22页 |
| ·培养基配方及培养条件 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-24页 |
| ·主要分子生物学试剂 | 第22-23页 |
| ·DNA重组所需试剂 | 第23页 |
| ·SDS-PAGE所需试剂 | 第23页 |
| ·WESTEN BLOT所需试剂 | 第23页 |
| ·抗体 | 第23页 |
| ·透明质酸酶酶活检测所需试剂 | 第23-24页 |
| ·仪器 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-31页 |
| ·兽疫链球菌基因组的提取 | 第24-25页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第25页 |
| ·DNA体外重组 | 第25页 |
| ·重组质粒的转化和转化子的筛选鉴定 | 第25-26页 |
| ·PCR扩增 | 第26页 |
| ·细菌细胞表面定位实验方法 | 第26-27页 |
| ·样品处理及SDS-PAGE电泳 | 第26-27页 |
| ·WESTERN BLOT实验 | 第27页 |
| ·蛋白酶处理实验 | 第27页 |
| ·细菌细胞表面展示条件优化研究 | 第27-29页 |
| ·大肠杆菌表面展示体系IPTG诱导浓度优化实验 | 第27页 |
| ·大肠杆菌表面展示体系IPTG诱导温度优化实验 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌表面展示体系IPTG诱导时间与菌体生长关系测定 | 第28页 |
| ·大肠杆菌表面展示体系透明质酸酶表达与细菌生长曲线的关系 | 第28页 |
| ·大肠杆菌表面展示体系反应条件优化实验 | 第28-29页 |
| ·细菌细胞表面展示透明质酸酶活性测定 | 第29-31页 |
| ·光谱分析法 | 第29页 |
| ·粘度法 | 第29页 |
| ·浊度法 | 第29-30页 |
| ·MORGAN-ELSON法 | 第30页 |
| ·软件和网站 | 第30-31页 |
| 第3章 结果与分析 | 第31-46页 |
| ·透明质酸酶基因的克隆、序列分析及重组质粒的构建 | 第31-36页 |
| ·透明质酸酶基因的克隆 | 第31-32页 |
| ·透明质酸酶编码基因的序列分析 | 第32页 |
| ·透明质酸酶氨基酸序列及结构分析 | 第32-36页 |
| ·细菌表面展示透明质酸酶体系的建立 | 第36-37页 |
| ·细菌表面展示透明质酸酶重组菌的构建 | 第36-37页 |
| ·细菌细胞表面展示透明质酸酶诱导条件优化实验 | 第37-39页 |
| ·细菌表面展示体系对菌体生长的影响 | 第37-38页 |
| ·IPTG诱导浓度对细菌细胞表面展示影响 | 第38页 |
| ·诱导温度对细菌细胞表面展示的影响 | 第38-39页 |
| ·融合蛋白INAQ-N/HYAL的表面定位分析 | 第39-40页 |
| ·SDS-PAGE和WESTERN BLOT分析 | 第39-40页 |
| ·蛋白酶降解分析 | 第40页 |
| ·细菌细胞表面展示透明质酸酶反应条件优化实验 | 第40-42页 |
| ·不同反应温度对细菌细胞表面展示的影响 | 第40-41页 |
| ·CA~(2+)浓度对细菌细胞表面展示的影响 | 第41-42页 |
| ·不同反应PH对细菌细胞表面展示的影响 | 第42页 |
| ·透明质酸酶细菌细胞表面展示应用研究 | 第42-46页 |
| ·HA降解能力测定 | 第42-43页 |
| ·粘度法检测细菌细胞表面展示透明质酸酶的活性研究 | 第43页 |
| ·浊度法检测细菌细胞表面展示透明质酸酶的活性研究 | 第43-44页 |
| ·摩根-埃尔森法检测细菌细胞表面展示透明质酸酶的活性研究 | 第44-46页 |
| 第4章 讨论 | 第46-49页 |
| ·透明质酸酶序列分析 | 第46页 |
| ·透明质酸酶及冰晶核蛋白的分泌锚定相关结构域的分析 | 第46-47页 |
| ·INAQ-N展示性能分析 | 第46页 |
| ·表面展示条件优化 | 第46-47页 |
| ·全细胞透明质酸酶活性 | 第47页 |
| ·全细胞透明质酸酶的应用分析 | 第47页 |
| ·不同酶活检测方法的比较 | 第47-49页 |
| 第5章 总结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-57页 |
| 附录1 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 硕士期间发表的学术论文 | 第60页 |
