| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 引言 | 第14-17页 |
| 1 文献综述 | 第17-25页 |
| ·蚜虫生理与寄主植物的取食 | 第17-18页 |
| ·豌豆蚜生物学特性 | 第17页 |
| ·蚜虫取食行为与植物的防御免疫 | 第17-18页 |
| ·豌豆蚜唾液腺蛋白研究进展 | 第18-21页 |
| ·唾液蛋白的功能 | 第19页 |
| ·蛋白合成和分泌 | 第19页 |
| ·解毒 | 第19页 |
| ·蛋白修饰和转化 | 第19页 |
| ·Armet蛋白的研究进展 | 第19-20页 |
| ·血管紧张素转移酶(ACE)的研究进展 | 第20-21页 |
| ·哺乳动物中ACE的研究概况 | 第20页 |
| ·昆虫中ACE的研究概况 | 第20-21页 |
| ·内质网胁迫的研究进展 | 第21-22页 |
| ·内质网胁迫的产生 | 第21页 |
| ·非折叠蛋白响应 | 第21-22页 |
| ·与内质网胁迫相关作用元件 | 第22页 |
| ·刺探电位图谱技术(EPG) | 第22-24页 |
| ·刺探电位图谱的技术的原理 | 第22-23页 |
| ·刺探电位图谱对蚜虫取食行为的检测 | 第23-24页 |
| ·转录组测序技术 | 第24页 |
| ·问题的提出及研究目的 | 第24-25页 |
| 2 ARMET蛋白胞内功能研究——响应内质网胁迫 | 第25-50页 |
| ·实验材料、试剂和方法 | 第25-44页 |
| ·载体与菌株 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25页 |
| ·溶液配制 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-44页 |
| ·豌豆蚜Armet全长基因的获得 | 第26-28页 |
| ·克隆ATF6和部分NY-F转录因子序列 | 第28-29页 |
| ·豌豆蚜转录因子NY-F全长的获得(RACE) | 第29-32页 |
| ·豌豆蚜Armet基因的启动子区序列的克隆和鉴定 | 第32-34页 |
| ·表达载体pisCHECKTM-2::Armet-promoter的构建 | 第34-37页 |
| ·表达载体pisCHECKTM-2::Armet-promoter-ERSE1-deletion的构建 | 第37-38页 |
| ·表达载体pisCHECKTM-2::Armet-promoter-ERSE1-replacement的构建 | 第38-39页 |
| ·表达载体pisCHECKTM-2::Armet-promoter-ERSE2-deletion的构建 | 第39页 |
| ·表达载体pisCHECKTM-2::Armet-promoter-ERSE2-replacement的构建 | 第39-40页 |
| ·表达载体pisCHECKTM-2::Armet-promoter-dual-deletion的构建 | 第40页 |
| ·表达载体pisCHECKTM-2::Armet-promoter-dual-replacement的构建 | 第40-41页 |
| ·小牛胎盘血清(FBS)的灭火 | 第41页 |
| ·果蝇S2培养基的配方 | 第41页 |
| ·果蝇S2细胞系的活化、培养和传代 | 第41-42页 |
| ·荧光表达载体转染果蝇S2细胞系 | 第42页 |
| ·荧光表达载体转染夜盗蛾Sf9细胞系 | 第42页 |
| ·对转染荧光表达载体的昆虫细胞系的检测 | 第42-43页 |
| ·定量验证衣霉素处理下的豌豆蚜对内质网胁迫的响应 | 第43-44页 |
| ·结果 | 第44-49页 |
| ·Armet的核酸序列分析和蛋白结构预测 | 第44-45页 |
| ·转录调节因子的克隆结果 | 第45页 |
| ·Armet基因及相关转录调节因子对内质网胁迫的响应 | 第45-46页 |
| ·Armet启动子响应内质网胁迫 | 第46-49页 |
| ·昆虫细胞系对ERSE1突变的响应 | 第46-47页 |
| ·昆虫细胞系对ERSE2突变的响应 | 第47-48页 |
| ·昆虫细胞系对ERSE1和ERSE2双突变表型 | 第48-49页 |
| ·讨论 | 第49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 3. ARMET蛋白胞外功能研究——参与豌豆蚜取食行为 | 第50-58页 |
| ·实验材料、试剂和方法 | 第50-54页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·质粒与菌株 | 第50页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第50-51页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第51页 |
| ·试验器械 | 第51页 |
| ·方法 | 第51-54页 |
| ·豌豆蚜龄期的控制 | 第51页 |
| ·双链RNA的合成 | 第51-52页 |
| ·干扰豌豆蚜Armet基因 | 第52页 |
| ·豌豆蚜生存曲线的观察和统计 | 第52-53页 |
| ·豌豆蚜总RNA的提取(参见Qiagen RNeasy Mini Kit说明书) | 第53-54页 |
| ·豌豆蚜总RNA的DnaseI消化处理 | 第54页 |
| ·定量验证Armet的干扰效果 | 第54页 |
| ·豌豆蚜取食行为的检测和分析 | 第54页 |
| ·结果 | 第54-57页 |
| ·Armet的表达水平与豌豆蚜取食环境的关系 | 第54-55页 |
| ·干扰Armet基因对豌豆蚜生存的影响 | 第55-56页 |
| ·干扰Armet基因对豌豆蚜取食行为的影响 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 4 ARMET蛋白在植物中的功能分析 | 第58-67页 |
| ·实验材料、试剂和方法 | 第58-62页 |
| ·实验材料 | 第58页 |
| ·质粒与菌株 | 第58页 |
| ·溶液配制 | 第58页 |
| ·方法 | 第58-62页 |
| ·Armet原核表达载体的构建 | 第58页 |
| ·Armet蛋白的原核表达和纯化 | 第58-60页 |
| ·烟草注射蛋白 | 第60页 |
| ·转录组测序 | 第60-62页 |
| ·结果 | 第62-66页 |
| ·Armet蛋白的诱导表达及纯化 | 第62-63页 |
| ·Illumina测序和序列组装 | 第63页 |
| ·预测蛋白质的功能注释 | 第63页 |
| ·注射Armet蛋白和对照相比的差异表达基因 | 第63-65页 |
| ·差异表达基因的qRT-PCR验证 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66页 |
| ·小结 | 第66-67页 |
| 5 豌豆蚜ACE基因家族的进化分析 | 第67-73页 |
| ·实验材料、试剂和方法 | 第67-69页 |
| ·实验材料 | 第67页 |
| ·质粒和菌株 | 第67页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第67页 |
| ·溶液及培养基的配制 | 第67-68页 |
| ·实验器械 | 第68页 |
| ·方法 | 第68-69页 |
| ·豌豆蚜ACE家族全长基因的获得 | 第68-69页 |
| ·系统进化树的构建 | 第69页 |
| ·氨基酸序列比对 | 第69页 |
| ·结果 | 第69-72页 |
| ·蚜虫ACE家族基因和蛋白的鉴定 | 第69-70页 |
| ·氨基酸序列比对 | 第70-71页 |
| ·ACE的系统发育树 | 第71-72页 |
| ·讨论 | 第72页 |
| ·小结 | 第72-73页 |
| 6 豌豆蚜ACE基因家族的时空表达特点 | 第73-77页 |
| ·实验材料、试剂和方法 | 第73-75页 |
| ·实验材料 | 第73页 |
| ·质粒和菌株 | 第73页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第73页 |
| ·溶液及培养基的配制 | 第73-74页 |
| ·实验器械 | 第74页 |
| ·方法 | 第74-75页 |
| ·豌豆蚜龄期控制 | 第74页 |
| ·豌豆蚜RNA的提取(参见Qiagen RNeasy Mini Kit说明书)) | 第74页 |
| ·Dnasel消化处理豌豆蚜总RNA | 第74-75页 |
| ·使用Promega反转录体系 | 第75页 |
| ·定量PCR | 第75页 |
| ·结果 | 第75-76页 |
| ·豌豆蚜ACE基因在不同龄期的表达分布 | 第75-76页 |
| ·豌豆蚜ACE基因在不同组织的表达分布 | 第76页 |
| ·讨论 | 第76页 |
| ·小结 | 第76-77页 |
| 7 ACE家族基因对豌豆蚜行为的影响 | 第77-87页 |
| ·实验材料和方法 | 第77-80页 |
| ·实验材料 | 第77页 |
| ·质粒与菌株 | 第77页 |
| ·试剂和试剂盒 | 第77-78页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第78页 |
| ·方法 | 第78-80页 |
| ·豌豆蚜龄期控制 | 第78页 |
| ·双链RNA的合成 | 第78-79页 |
| ·注射豌豆蚜dsACEs | 第79页 |
| ·观察豌豆蚜的生存状况 | 第79-80页 |
| ·豌豆蚜ACE家族的EPG | 第80页 |
| ·结果 | 第80-85页 |
| ·ACE基因的表达水平与豌豆蚜取食环境的关系 | 第80-81页 |
| ·干扰ACE基因对豌豆蚜生存的影响 | 第81-82页 |
| ·双干扰ACE1和ACE2基因的对豌豆蚜生存的影响 | 第82-83页 |
| ·干扰ACE基因对豌豆蚜取食行为的影响 | 第83页 |
| ·干扰ACE基因对豌豆蚜生殖的影响 | 第83-84页 |
| ·在植物毒素处理下双干扰ACE1和ACE2基因对豌豆蚜生存的影响 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85页 |
| ·小结 | 第85-87页 |
| 8 结论与展望 | 第87-89页 |
| ·结论 | 第87页 |
| ·创新点 | 第87-88页 |
| ·展望 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-98页 |
| 个人简介 | 第98-99页 |
| 博士在读期间成果清单 | 第99-100页 |
| 导师简介 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
