| 致谢 | 第1-13页 |
| 摘要 | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-20页 |
| 1 文献综述 | 第14-19页 |
| ·非生物逆境胁迫对植物的影响 | 第14-15页 |
| ·干旱对植物的影响 | 第14-15页 |
| ·盐胁迫对植物的影响 | 第15页 |
| ·MVB途径 | 第15-17页 |
| ·拟南芥T-DNA突变体的研究 | 第17页 |
| ·植物启动子的研究 | 第17页 |
| ·农杆菌介导的植物转基因方法 | 第17-18页 |
| ·拟南芥的花序浸染法(Floral-dip) | 第18页 |
| ·酵母中基因的研究方法 | 第18页 |
| ·展望 | 第18-19页 |
| 2 引言 | 第19-20页 |
| 第二章 ZmLip5和AtLip5的基因克隆与序列分析 | 第20-29页 |
| 1 材料 | 第20页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·试剂和酶 | 第20页 |
| 2 方法 | 第20-24页 |
| ·材料的处理 | 第20页 |
| ·RNA的提取、纯化及反转录 | 第20-22页 |
| ·RNA提取 | 第20页 |
| ·RNA纯化 | 第20-21页 |
| ·电泳检测RNA的完整性 | 第21页 |
| ·RNA纯度检测 | 第21页 |
| ·RNA的反转录 | 第21-22页 |
| ·ZmLip5和AtLip5目的基因的获得 | 第22页 |
| ·切胶回收基因片段 | 第22-23页 |
| ·T载体连接并转化大肠杆菌 | 第23-24页 |
| ·基因片段连接到T载体 | 第23页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH10B | 第23-24页 |
| ·DH10B大肠杆菌感受态制备方法 | 第23页 |
| ·连接产物转化到大肠杆菌 | 第23页 |
| ·菌落PCR检测 | 第23-24页 |
| ·ZmLip5和AtLip5基因测序及序列分析 | 第24页 |
| ·基因序列分析 | 第24页 |
| ·同源性分析 | 第24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-27页 |
| ·ZmLip5和AtLip5目的基因的获得 | 第24-25页 |
| ·玉米郑58和拟南芥col 0总RNA提取与检测 | 第24页 |
| ·基因全长克隆 | 第24-25页 |
| ·ZmLip5和AtLip5基因片段的序列分析 | 第25页 |
| ·Lip5的互作分析与进化树分析 | 第25-27页 |
| 4 小结与讨论 | 第27-29页 |
| ·小结 | 第27页 |
| ·讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 ZmLip5和AtLip5表达模式分析 | 第29-47页 |
| 1 材料 | 第29-31页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·菌种和载体 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29-30页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-32页 |
| ·植物培养方法 | 第31-32页 |
| ·玉米材料的处理与取样 | 第31页 |
| ·拟南芥材料的处理与取样 | 第31-32页 |
| ·GUS染色方法 | 第32页 |
| ·RNA的提取、纯化及反转录 | 第32页 |
| ·RNA提取 | 第32页 |
| ·RNA纯化 | 第32页 |
| ·电泳检测RNA的完整性 | 第32页 |
| ·RNA纯度检测 | 第32页 |
| ·RNA的反转录 | 第32页 |
| 3 实时荧光定量PCR(real-time PCR)分析基因的表达 | 第32-34页 |
| ·SYBR的作用原理 | 第32-33页 |
| ·荧光real-time PCR所用引物 | 第33页 |
| ·荧光real-time PCR体系 | 第33页 |
| ·荧光real-time PCR程序 | 第33页 |
| ·数据分析 | 第33-34页 |
| 4 植物启动子表达载体的构建 | 第34-39页 |
| ·ZmLip5-P、AtLip5-P的制备 | 第34页 |
| ·植物基因组DNA的提取 | 第34页 |
| ·提取DNA的纯化 | 第34页 |
| ·目的基因的制备 | 第34-36页 |
| ·目的基因扩增 | 第34-35页 |
| ·目的基因的回收 | 第35页 |
| ·限制性酶切目的基因 | 第35-36页 |
| ·带有GUS的植物表达载体PCAMBIA1381制备 | 第36页 |
| ·带有GUS的植物表达载体提取 | 第36页 |
| ·限制性酶切带有GUS的植物表达载体 | 第36页 |
| ·重组载体构建(ZmLip5-P、AtLip5-P) | 第36页 |
| ·连接 | 第36页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第36页 |
| ·菌落PCR | 第36页 |
| ·质粒PCR和酶切检测 | 第36页 |
| ·转化农杆菌GV3101 | 第36-37页 |
| ·制备农杆菌感受态细胞 | 第36页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第36-37页 |
| ·菌落PCR检测 | 第37页 |
| ·拟南芥花序浸染Floral Dip法转化拟南芥 | 第37-38页 |
| ·拟南芥的种植 | 第37页 |
| ·Floral dip法转化拟南芥 | 第37页 |
| ·转基因拟南芥ZmLip5-P/WT、AtLip5-P/WT的T_1代筛选及验证 | 第37-38页 |
| ·转基因的验证 | 第38-39页 |
| ·转基因拟南芥DNA的提取及PCR检测 | 第38页 |
| ·拟南芥提取DNA的纯化 | 第38页 |
| ·PCR扩增体系验证 | 第38-39页 |
| 5. 结果与分析 | 第39-45页 |
| ·ZmLip5在不同胁迫下的表达分析 | 第39-40页 |
| ·ZmLip5组织特异性表达 | 第40页 |
| ·AtLip5在不同胁迫下的表达分析 | 第40页 |
| ·AtLip5组织特异性表达 | 第40-41页 |
| ·ZmLip5和AtLip5启动子生物信息学分析 | 第41页 |
| ·ZmLip5和AtLip5启动子的克隆与载体构建 | 第41-42页 |
| ·Floral dip法获得ZmLip5-P和AtLip5-P转基因植株并检测 | 第42-44页 |
| ·转基因植株鉴定 | 第43-44页 |
| ·GUS组织化学染色分析AtLip5启动子的功能 | 第44-45页 |
| 6 结论与讨论 | 第45-47页 |
| ·小结 | 第45页 |
| ·讨论 | 第45-47页 |
| 第四章 ZmLip5和AtLip5在酵母中的功能分析 | 第47-56页 |
| 1 材料 | 第47-49页 |
| ·菌种和载体 | 第47页 |
| ·试剂 | 第47页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第47-49页 |
| ·引物序列 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-51页 |
| ·目的基因获得 | 第49-50页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第50页 |
| ·重组质粒pYES2-ZmLip5、pYES2-AtLip5大肠杆菌菌落PCR鉴定 | 第50页 |
| ·重组质粒pYES2-ZmLip5、pYES2-AtLip5提取与酶切检测 | 第50页 |
| ·重组质粒pYES2-ZmLip5、pYES2-AtLip5转化酵母 | 第50-51页 |
| ·酵母感受态细胞制备 | 第50页 |
| ·PEG/LiAC法转化酵母细胞 | 第50-51页 |
| ·酵母菌落PCR鉴定 | 第51页 |
| ·阳性克隆的盐与甘露醇处理 | 第51页 |
| ·盐胁迫 | 第51页 |
| ·Man胁迫 | 第51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-54页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第51-53页 |
| ·酵母生长实验结果 | 第53-54页 |
| ·酵母平板实验 | 第53-54页 |
| ·酵母胁迫生长曲线绘制 | 第54页 |
| 4 小结与讨论 | 第54-56页 |
| ·小结 | 第54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 拟南芥AtLip5生理学功能分析 | 第56-67页 |
| 1 材料 | 第56-57页 |
| ·植物材料 | 第56页 |
| ·菌种和载体 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第56-57页 |
| ·引物序列 | 第57页 |
| 2 实验方法 | 第57-61页 |
| ·植物材料培养 | 第57页 |
| ·组织基因组DNA粗提取 | 第57-58页 |
| ·特异性引物扩增检测纯合系 | 第58-59页 |
| ·第一对引物筛选LP+RP | 第58页 |
| ·第二对引物鉴定LP+LBb1.3 | 第58-59页 |
| ·拟南芥AtLip5的克隆与植物表达PMW101:AtLip5载体构建 | 第59-60页 |
| ·拟南芥AtLip5的克隆 | 第59-60页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第60页 |
| ·菌落PCR | 第60页 |
| ·质粒PCR和酶切检测 | 第60页 |
| ·转化农杆菌GV3101 | 第60页 |
| ·菌落PCR检测 | 第60页 |
| ·拟南芥花序浸染Floral Dip法转化拟南芥 | 第60页 |
| ·拟南芥的种植 | 第60页 |
| ·Floral Dip法转化拟南芥 | 第60页 |
| ·转基因拟南芥T_1代筛选及验证 | 第60页 |
| ·转基因的验证 | 第60-61页 |
| ·转基因拟南芥DNA的提取及PCR检测 | 第60页 |
| ·转基因拟南芥qPCR检测 | 第60-61页 |
| ·RNA提取 | 第60页 |
| ·RNA纯化 | 第60-61页 |
| ·电泳检测RNA的完整性 | 第61页 |
| ·RNA纯度检测 | 第61页 |
| ·RNA的反转录 | 第61页 |
| ·定量检测 | 第61页 |
| ·数据分析 | 第61页 |
| 3 拟南芥T-DNA突变株和过量表达突变体逆境胁迫处理方法 | 第61页 |
| ·盐胁迫 | 第61页 |
| ·ABA胁迫 | 第61页 |
| 4 结果与分析 | 第61-65页 |
| ·拟南芥Lip5突变体纯合系鉴定 | 第61-62页 |
| ·Lip5突变体纯合系逆境胁迫下的表型鉴定 | 第62-64页 |
| ·AtLip5转基因系的获得 | 第64-65页 |
| 5 小结与讨论 | 第65-67页 |
| ·小结 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| 第六章 玉米中Lip5生理学功能分析 | 第67-76页 |
| 1 材料 | 第67-68页 |
| ·植物材料 | 第67页 |
| ·菌种和载体 | 第67页 |
| ·试剂 | 第67页 |
| ·培养基和溶液的配制 | 第67-68页 |
| ·引物序列 | 第68页 |
| 2 实验方法 | 第68-71页 |
| ·植物材料培养 | 第68-69页 |
| ·ZmLip5的克隆与植物表达PMW101：ZmLip5载体构建 | 第69-70页 |
| ·拟南芥ZmLip5的克隆 | 第69页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第69-70页 |
| ·菌落PCR | 第70页 |
| ·质粒PCR和酶切检测 | 第70页 |
| ·转化农杆菌GV3101 | 第70页 |
| ·菌落PCR检测 | 第70页 |
| ·拟南芥花序浸染Floral Dip法转化拟南芥 | 第70页 |
| ·拟南芥的种植 | 第70页 |
| ·Floral Dip法转化拟南芥 | 第70页 |
| ·转基因拟南芥ZmLip5/WT、ZmLip5/atLip5 T1代筛选及验证 | 第70页 |
| ·转基因的验证 | 第70-71页 |
| ·转基因拟南芥DNA的提取及PCR检测 | 第70页 |
| ·转基因拟南芥qPCR检测 | 第70-71页 |
| ·RNA提取 | 第70页 |
| ·RNA纯化 | 第70页 |
| ·电泳检测RNA的完整性 | 第70页 |
| ·RNA纯度检测 | 第70-71页 |
| ·RNA的反转录 | 第71页 |
| ·定量检测 | 第71页 |
| ·数据分析 | 第71页 |
| 3 玉米不同自交系对盐和干旱抗感性差异鉴定 | 第71页 |
| ·干旱胁迫 | 第71页 |
| ·盐胁迫 | 第71页 |
| 4 玉米不同自交系对盐、干旱与表达量相关性分析 | 第71-72页 |
| ·RNA提取 | 第71-72页 |
| ·RNA纯化 | 第71页 |
| ·电泳检测RNA的完整性 | 第71页 |
| ·RNA纯度检测 | 第71-72页 |
| ·RNA的反转录 | 第72页 |
| ·定量检测 | 第72页 |
| ·数据分析 | 第72页 |
| 5 结果与分析 | 第72-75页 |
| ·ZmLip5转基因系的获得 | 第72-74页 |
| ·47个玉米自交系的抗感相关性鉴定 | 第74-75页 |
| 6 小结与讨论 | 第75-76页 |
| ·小结 | 第75页 |
| ·讨论 | 第75-76页 |
| 第七章 结论 | 第76-77页 |
| 1 结论 | 第76页 |
| 2 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-82页 |
| Abstract | 第82-84页 |
| 附件 | 第84页 |
